逆基因nanogp8的表达与人胃癌sgc-7901细胞生物学特性相关-the expression of the inverse gene nano gp 8 is related to the biological characteristics of human gastric cancer sgc - 7901 cells.docxVIP

英汉缩略语名词对照英文缩写Bp英文全称basepair中文全称碱基对CCK-8CellCountingKit-8细胞计数CCK-8试剂盒cDNAcomplementaryDNA互补DNAdNTPdeoxynucleotidetriphosphate脱氧三磷酸腺苷DNaseDiethyribonuclease脱氧核糖核酸酶EDTAethylenedaminetetraaceticacid乙二胺四乙酸二钠GFPgreenfluorescenceprotein绿色荧光蛋白DNAdeoxyribonucleicacid脱氧核糖核酸KDKilodalton千道尔顿ODopticaldensity光密度值PMSFphenylmethan-sulfonylfluorid苯甲基磺酰氟DMSOdimethylsulphoxide二甲基亚砜PCRpolymerasechainreaction聚合酶链反应PBSphosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液PVDFpolyvinylidenefluoride聚偏氟乙烯RNaseRibonuclease核糖核酸酶RNAribonucleicAcid核糖核酸RTreversetranscription逆转录rpmrevolutionsperminute转/分SDSsodiumdodecylsulfonate十二烷基磺酸钠TBSTris-bufferedsalineTris缓冲液shRNAshorthairpinRNA短发夹样RNAsiRNAsmallinterferingRNA小干扰RNATEMEDtetramethylethylenediamine四甲基乙二胺PI7-AAD3′UTRprodiumiodide7-aminoactinomycin3′-UntranslatedRegion碘化丙啶7-氨基放线菌素D3′非翻译区1逆基因NANOGP8的表达与人胃癌SGC-7901细胞的生物学特性相关摘要目的：构建pEGFP-NI-NANOGP8真核表达载体及针对人NANOGP8基因的干扰质粒pshRNA-NANOGP8；探讨重组质粒pEGFP-N1-NANOGP8及pshRNA-NANOGP8对人胃癌细胞SGC-7901的增殖、凋亡、周期、迁移、侵袭的影响，为更深入研究逆基因NANOGP8在胃癌发生发展中的具体作用机制奠定基础。方法：（1）从人卵巢癌细胞SKOV-3中提取总RNA，通过RT-PCR获得NANOGP8基因，将其克隆到pEGFP-N1质粒上，构建pEGFP-NI-NANOGP8真核表达载体，将构建好的重组质粒进行双酶切及测序鉴定；（2）构建针对人NANOGP8基因的干扰质粒pshRNA-NANOGP8及阴性对照质粒pshRNA-negative，将构建好的两个重组质粒进行酶切、测序鉴定；（3）将测序正确的重组质粒在脂质体2000的介导下转染入人胃癌SGC-7901细胞，通过荧光显微镜、逆转录PCR及Westernblot法检测其表达情况；通过CCK-8方法检测SGC-7901胃癌细胞增殖情况；利用流式细胞仪分析胃癌细胞周期变化及凋亡情况；Transwell?实验验证SGC-7901细胞迁移以及侵袭能力的改变情况。结果：（1）通过RT-PCR成功获得NANOGP8基因片段，经酶切、2测序验证成功构建出PEGEP-N1-NANOGP8重组质粒；（2）经酶切、测序验证成功构建出pshRNA-NANOGP8及pshRNA-negative重组质粒；（3）重组质粒转染48小时后的胃癌SGC-7901细胞能够通过荧光显微镜观察到荧光蛋白的表达；逆转录PCR及Westernblot结果显示PEGEP-N1-NANOGP8转染组高表达NANOGP8，并能检测到NANOGP8-GFP融合蛋白的表达，而pshRNA-NANOGP8转染组NANOGP8低表达;NANOGP8高表达组能促进肿瘤细胞增殖，促使细胞进入S期，迁移侵袭能力明显增强。而低表达组细胞增殖受到明显抑制，细胞大量停留在G0/G1期，细胞的侵袭、迁移能力也同样受到抑制。结论：逆基因NANOGP8的转录表达，与胃癌的增殖、细胞周期、凋亡、迁移、侵袭有密切的关系。关键词：逆基因，NANOGP8，胃癌，增殖，凋亡，侵袭3EFFECTOFRETROGENENANOGP8ONTHEBIOLOGICALCHARACTERISTICSOFHUMANGASTRICCANCERCELLSABSTRACTOBJECTIVE:ToconstructaneukaryoticexpressionvectorpEGFP-N1-NANOGP8andrecombinantplasmidsshRNA-NANOGP8whichcouldinhibittheexpression