芹菜素与trail合用对hela细胞活性氧生成和凋亡影响-effect of apigenin combined with trail on active oxygen production and apoptosis in hela cells.docxVIP

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2018-07-28 发布于上海
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芹菜素与trail合用对hela细胞活性氧生成和凋亡影响-effect of apigenin combined with trail on active oxygen production and apoptosis in hela cells

中英文缩略词表缩略词A英文全称Absorbance中文全称吸光度TNF-relatedapoptosis-inducing肿瘤坏死因子相关凋TRAILligand亡诱导配体DR5Deathreceptor5死亡受体5APIApigenin芹菜素Apaf1apoptoticproteaseactivatingfactor1凋亡蛋白酶活化因子1DMSODimethylsulfoxide二甲基亚砜CRDcysteine-richdomains富含半胱氨酸的结构FCMFlowcytometry流式细胞术FCSFetalcalfserum小牛血清DcR1decoyreceptor1诱饵受体1DR4Deathreceptor4死亡受体4IC50DcR250%inhibitoryconcentrationdecoyreceptor250%抑制浓度诱饵受体2IRInhibitionratio抑制率OPGosteoprotegerin骨保护素X-linkedinhibitorofapoptosisXIAPproteinX-连锁凋亡抑制蛋白PBSPhosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液PIPropidiumiodide碘化丙啶S.DStandandDeviation标准差ROSreactiveoxygenspecies活性氧中文摘要目的研究芹菜素(API)与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)合用对人宫颈癌HeLa细胞凋亡影响，并探讨其作用机制是否涉及促进活性氧生成。方法体外培养人宫颈癌HeLa细胞。全自动生化分析仪测定细胞培养液的乳酸脱氢酶(LDH)活性。台盼蓝拒染法检测细胞死亡数。碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)定量分析细胞凋亡率(亚二倍体DNA含量细胞百分率)。ELISA法测定细胞Caspase-3活性。DNA琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA梯形条带。DCFH-DA荧光探针FCM检测细胞活性氧。结果通过测定细胞培养液乳酸脱氢酶的活性的细胞毒性实验结果显示，API和TRAIL以及两者合用对人宫颈癌HeLa细胞毒性的EC50值分别是104μmol/L、236ng/mL和23ng/mL，药物合并效应的CI值是0.3186。台盼蓝拒染法的结果表明，API和TRAIL以及两者合用诱导人宫颈癌HeLa细胞死亡的EC50值分别是109μmol/L、163ng/mL和43ng/mL，药物合并效应的CI值为0.4562。碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)分析结果发现：20μmol/LAPI和20ng/mLTRAIL以及两者合用的人宫颈癌HeLa细胞凋亡率分别是3.56%±0.20%、6.69%±0.40%和59.87%±4.20%。20μmol/LAPI、20ng/mLTRAIL以及两者合用48小时，ELISA检测结果发现人宫颈癌HeLa细胞Caspase-3的活性分别是培养基对照组的1.4、1.5和39倍。DNA琼脂糖凝胶电泳显示：20μmol/L的API预孵育4小时，再加入20ng/mL的TRAIL处理44小时，展示出典型DNA梯形条带图谱。DCFH-DA荧光探针FCM检测的结果发现：API以浓度的方式增高人宫颈癌HeLa细胞活性氧水平。N-乙酰半胱氨酸能拮抗API增强TRAIL诱导细胞凋亡作用。结论1.亚毒性浓度的API具有增强TRAIL诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡作用。2.API敏化TRAIL诱导细胞凋亡作用的机制与促进细胞活性氧生成相关。关键词宫颈癌；芹菜素；肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体；凋亡；增敏作用EffectsofthecombinationofapigeninandTRAILonapoptosisofhumancervicalcancerHeLacelllineAbstractObjectiveToinvestigatewhetherapigenin(API)enhanceapoptosisinducedbyTNF-relatedapoptosis-inducingligand(TRAIL)throughpromotinggenerationofreactiveoxygenspecies(ROS)inhumancervicalcancerHeLacellline.MethodsHumancervicalcancerHeLacellswereculturedinvitro.Thelactatedehydrogenaseactivityofcellmediumwasevaluatedbyautomaticbiochemisitryanalyzer.Thecelldeathwasdetectedbytrypanblueexclusion.Thepercentageofsub-G1cellswasdetermine