清热化瘀ⅱ号方对大鼠脑缺血再灌注损伤tlr4和trif mrna表达的影响-effect of qingre huayu ⅱ recipe on tl r4 and trif mrna expression in rats with cerebral ischemia-reperfusion injury.docxVIP

清热化瘀 II 号方对大鼠脑缺血再灌注损伤 TLR4 和 TRIF mRNA 表达的影响 中 文 摘 要 目的： 通过观察清热化瘀 II 号方对脑缺血再灌注损伤大鼠脑内 Toll 样受体 4（TLR4）和 TIR 结构域衔接蛋白（TRIF）mRNA 表达的影 响，探讨清热化瘀 II 号方对防治脑缺血性再灌注损伤的作用机制，为其 临床应用提供实验依据，并为中医药防治脑血管病提供思路借鉴。 方法： 将成年 SD 大鼠 192 只（雌雄各半），随机分为两大组， 每组 96 只再随机分为四组，即空白对照组（A 组）：6 只，假手术组（B 组）：30 只，模型组（C 组）：30 只，清热化瘀 II 号方组（D 组）：30 只。B、C、D 每组按照缺血 2h 后再灌注 3h、6h、12h、24h、48h 五个时 间点分为 5 个亚组（n=6），并分别作如下处理：A 组正常饲养，自由饮 食。B 组线栓只插入颈内动脉 9mm,术后正常饲养，灌胃生理盐水。C 组 生理盐水灌胃 7d 后行 MCAO2h，缺血再灌注后按各个时间点将动物完全 处死。D 组予清热化瘀 II 号方灌胃 7d，术后继续灌胃给药，余操作方法 与 C 组相同。取材后将一组脑组织行常规 HE 染色并在光学显微镜下观 察其病理形态学改变。另一大组取材后采用实时荧光定量 PCR 法观察各 个时间点 TLR4、TRIF mRNA 的表达变化。 结果：（1）清热化瘀 II 号方能改善大鼠脑神经功能缺损症状，D 组 行为评分与 C 组相比差异具有统计学意义（P0.05）。（2）HE 染色结果： 光镜下观察 A 组与 B 组均未见神经元损伤，D 组与 C 组的脑组织病理形 态学比较，在各个时间点神经元受损明显减轻。（3）荧光定量 PCR 反应 结果：①TLR4、TRIF mRNA 在 A 组 B 组均有少量表达，其组间无明显 差异（P0.05）；C 组缺血各时间点其表达含量较其他组均明显增多 (P0.05)。②C 组大鼠随再灌注时间的延长 TLR4、TRIFmRNA 的表达含 量逐渐升高，脑缺血再灌注 24h 后其 mRNA 表达达高峰,48h 后开始下降； D 组较 C 组各 时间 点其 表达 含量 显著 降低 ，差 异均 有统 计学 意义 （P0.05）。 结 论 ：清热化瘀 II 号方可促进脑缺血再灌注损伤后的神经功能恢 复，其作用机制可能与通过降低 TLR4 和 TRIF 的表达以减少神经元的凋 亡、炎症反应及脑组织受损程度进而改善脑内炎症环境有关。 关键词：清热化瘀 II 号方，脑缺血再灌注损伤，TLR4，TRIF The effect of Qingre Huayu Prescription II on the expression of TLR4 and TRIF mRNA after cerebral ischemia/reperfusion ABSTRACT Objective: To investigate the effect of Qingre Huayu Prescription Ⅱ (QRHY Ⅱ)on the expression of Toll like receptor-4 and TIR domain containing adaptor inducing IFN-β mRNA after focal cerebral ischemia/reperfusion (I/R) in rats and to discuss its contingent mechanism of cerebral ischemia-reperfusion injury,s prevention and cure, at the same time provide the experimental basis for its clinical application, and take example by Chinese medicine preventing and curing the cerebrovascular disease. Methods: Prepare 192 majority SD rats(males and females half each), and separate them randomly into two groups,96 rats were divided into the following four groups in each group:the normal control group(groupA,n=6), the sham operation group(group