《单核细胞增生李斯特菌检验》ppt课件.pptVIP

食品中单核细胞增生李斯特氏菌检验;李斯特氏菌属;单增李斯特氏菌能引起人、畜的李斯特氏菌病，感染后主要表现为败血症、脑膜炎和流产等。它广泛存在于自然界中。肉类、蛋类、禽类、海产品、乳制品、蔬菜等都可被污染。该菌在4℃的环境中仍可生长繁殖，是冷藏食品威胁人类健康的主要病原菌之一。 其易感人群主要为孕妇、老人、新生儿和免疫缺陷人群。大多数发达国家人类李斯特菌病发生率约为每一百万人2-15例，死亡率为13-34% 加拿大由单增李斯特氏菌污染肉制品引发李斯特菌病暴发，导致十几人死亡。很多国家都已经采取措施来控制食品中的单增李斯特氏菌，并制定了相应的标准。 ;;;检测程序 ;半量Fraser肉汤和Fraser肉汤;UVM;LEB和BLEB;检测程序---分离;修订原则;修订依据;修订内容;选择性增菌肉汤的比较和筛选;选择性增菌肉汤的比较和筛选;分离培养基的比较和筛选;;;MMA;;;;;;;检样 25 g(ml)样品+LB1增菌液225 mL，均质;;;;2.商业生化鉴定系统的应用 原国标中未涉及，FDA、AOAC标准使用API 10300、Vitek GPI（AOAC 989.13），这些方法都比较成熟，稳定性较好，已被许多国家和组织的标准采用。 我国许多单位也积累了较多的经验，使用最广泛的是API 10300, Vitek GPI，考虑到各种系统在国内的实际应用现状，拟定在生化鉴定方面“采纳API10300或Vitek GPI为传统生化鉴定方法的选择性替代方法”。;API10300;报告;;第二法　全自动酶联荧光免疫分析仪筛选法;操作步骤;;;;;;阴性结果可直接报告25 g/mL样品中未检出单核细胞增生李斯特氏菌。阳性结果的样品必须对保存于2 ℃～8 ℃的增菌肉汤进行确认;;第三法　全自动病原菌检测系统筛选法;增菌;生肉：称取25 ｇ样品于225 mLDemi-Fraser肉汤中，混匀后，30 °C± 1℃培养 22 h～24 h；移取100 μL转种于9.9 ml MOPS-BLEB 中（1:100），36 °C±1 ℃ 培养18 h～24 h。;熟肉制品：称取25 ｇ样品于225 mL UVM-LEB中，混匀后，30 °C±1 ℃培养 22 h～24 h；移取100 μL转种于9.9 mL MOPS-BLEB 中(1:100 )，36 °C±1 ℃ 培养18 h～24 h。 ;乳品：称取25 ｇ样品于225 mL LEB中，混匀后，在35 °C±1 ℃培养22 h～26 h；移取100 μL 转种于9 ml MOPS-BLEB 中 (1:100) ，36 °C±1 ℃ 培养18 h～24 h。;熏鱼：称取25 ｇ样??于225 mL LB1中，混匀后，35 °C±1 ℃培养22 h～26 h；移取1 mL 转种于9 ml MOPS-BLEB (1:10)，36 °C±1 ℃培养18 h～24 h。;上机操作;溶菌操作：在每个溶菌管加入200 μL配制好的溶菌试剂，取5 μL增菌肉汤加入相应的溶菌管中，盖上盖子。将溶菌管放在55 ℃加热槽中，加热60 min；再将溶菌管放在95 ℃的加热槽中，加热10 min；最后将溶菌管放在冷却槽上（冷却槽从冰箱取出后30 min内使用完毕），冷却5 min。剩余增菌肉汤保存于2 ℃～8 ℃，以备对阳性检测结果确认。;加热循环仪/检测仪：从菜单中选择“RUN FULL PROCESS”，加热到设定温度（热槽90 ℃，盖子100 ℃）。 ;溶菌产物转移：将PCR管支架放到专用冷却槽上，然后将PCR管放入到支架内。将所有的管盖放松并除去一排管盖。用多道加样器将50 μL溶菌产物加入此排管中，并用替代的透明盖密封PCR管。换用新吸头，重复上述操作，直至将所有样品转入PCR管中。;扩增和检测：按“PCR Wizard”的屏幕提示,将转移后的PCR管放入PCR仪/检测仪中开始扩增。全过程（扩增和检测）需要大约3.5 h。当检测完成后，“PCR Wizard”提示取出样品，并自动显示结果。 ;　　绿色“-”表示阴性结果 　　红色“+”表示阳性结果。 　　黄色“?”表示不确定结果 　　黄色“?”带斜线表示错误结果 不确定和错误结果，对保存于2 ℃～8 ℃的增菌肉汤重新上机检测。 阴性结果可直接报告25 g/mL样品中未检出单核细胞增生李斯特氏菌。 阳性结果的样品必须对保存于2 ℃～8 ℃的增菌肉汤进行确认。 ? ;;;