起搏通道电生理特性分析-analysis of electrophysiological characteristics of pacing channel.docx

独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本论文属于保密□，在年解密后适用本授权书。不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日摘要细胞是生命活动的基本单位。一切有机体都是由细胞构成的，它是有机体生长与发育的基础，也是遗传的基本单位，因此，没有细胞就没有完整的生命。所有的动物细胞都由一层薄膜所包围，这就是细胞膜(plasmamembrane)，细胞膜的作用是保持细胞内物质成分的稳定。但是，细胞膜并不是完全封闭的，细胞需要跟外界交换物质和能量，细胞膜上的离子通道就是具备这种功能的蛋白质，离子通道可以分为配体门控通道、电压门控通道、胞内信号门控通道和机械敏感通道四种类型。超极化激活的环核苷酸门控(hyperpolarization-activatedcyclicnucleotide-gated，HCN)通道(起搏通道)是一种能被电压和环磷酸腺苷(cAMP)调控的、无选择性阳离子通道，它介导的电流是Ih。Ih广泛的参与了对一系列生理活动的调控，包括心脏和神经元节律，某些可兴奋细胞的静息电位，神经信号的传递以及信号在树突中的整合等。Ih受自主神经系统和神经内分泌系统的调节以及某些病理状态的影响，Ih异常会导致心脏及精神方面的多种疾病。因此，研究Ih有重要的生理学意义。本文着重应用电生理膜片钳、全细胞钙成像、神经疼痛模型等技术对HCN通道的调控机制、在神经疼痛中的作用及其药理学特性进行了研究和探讨。本文主要研究结果和结论如下：（1）PKA信号通路在调控HCN通道活性中的作用。PKA广泛分布于细胞体内，参与了对一些列重要生理活动的调控。然而，抑制PKA对HCN通道活性有何影响，目前仍不清楚。为了弄清这一问题，我们选择了PKA的选择性抑制剂KT5720。在新鲜分离的大鼠DRG神经元上，综合运用全细胞电压钳、电流钳、单通道记录以及钙成像技术。揭示了PKA信号通路在调控HCN通道活性中发挥了极为重要的作用，KT5720抑制HCN通道活性，使其电流密度减小，半数开放电压向超极化方向移动，并使其通道开放的时间常数增加。此外，KT5720抑制PKA使DRG神经元上的动作电位减小、胞内Ca2+浓度降低，从而抑制DRG神经元的兴奋性。（2）HCN通道调控神经疼痛。神经疼痛通常由神经损伤引发，因其具有发病率高、难治愈等特点，已成为当今医学界亟待解决的主要问题之一。另一方面，DRG神经元是感觉传入的第一级神经元，在疼痛信号的传导过程中发挥着不可或缺的重要作用。因此，我们选择DRG神经元为研究对象，利用大鼠幸免神经损伤模型。综合运用多种电生理膜片钳实验方法，研究和探讨了HCN通道在调控神经疼痛中的机制，揭示了HCN通道是触发和维持神经疼痛的关键因素。在幸免神经损伤诱导的疼痛状态下，DRG神经元上的HCN通道活性显著增加，异位放电频率变快，且DRG形态发生变化。因此，HCN通道是有效治疗神经疼痛的潜在靶点。（3）麻黄碱对HCN通道的影响。麻黄碱作为一种肾上腺受体激动药，具有加强心收缩力、增加心输出量、加快心率、升高血压等作用。为了弄清麻黄碱的这些作用是否是通过HCN通道来实现的以及它对HCN通道电流有什么影响。我们采用传统的全细胞膜片钳实验方法，在新生的大鼠海马神经元和HEK细胞上记录到HCN通道电流Ih。实验结果显示，麻黄碱对Ih有抑制作用。经分析，我们认为HCN通道可能具备某种反馈及保护功能，即当血压和心率上升时，HCN通道能部分阻滞这种上升趋势，从而保护机体健康和生命安全。关键词：HCN通道;KT5720;神经疼痛;麻黄碱;膜片钳AbstractCellisthebasicunitoflife.Allorganismscomposedofcells,itisthebasisoforganismgrowthanddevelopment.It’salsothebasicunitofheredity.Overall,cellisthefundamentalelementoflife.Allanimalcellsaresurroundedbyalayeroff