桑树mcax1和mrd22基因的克隆及序列与表达分析-cloning, sequence and expression analysis of mulberry mcax 1 and mrd 22 genes.docxVIP

学 号：092300028 文 摘：本文在本课题组构建的桑树幼叶 cDNA 文库的基础上获得了 2 个 ESTs， 克隆了桑树 Ca2+/H+反向转运体蛋白基因和脱水应答蛋白基因，并对获得的序列 进行了分析和功能推断，用胁迫诱导的方法对这 2 个基因进行功能验证。本论文 的主要研究内容与结果如下： 1、桑树 Ca2+/H+反向转运体蛋白基因 CAX 的克隆，序列分析及诱导表达研究 植物体内的 Ca2+/H+反向转运体在 Ca2+介导的营养和信号转导中发挥着重要 的作用。选择桑树幼叶 cDNA 文库中功能注释为 Ca2+/H+反向转运体基因 CAX 的 一条 EST 序列设计引物，通过 cDNA 末端快速扩增（RACE）与反转录 PCR （RT-PCR）在桑品种育 7-11 的幼叶中克隆获得该基因的完整序列，命名为 MCAX-1(GenBank 登录号：JN716318)。序列分析显示：MCAX-1 全长 1784 bp， 包括 197 bp 的 5′端非翻译序列和 243 bp 的 3′端非翻译序列，含有 1 个 1 344 bp 的完整 ORF，编码 447 个氨基酸残基，预测蛋白质分子质量为 47.93 kD，等电 点为 5.67。构建的桑树和其他植物基于 Ca2+/H+反向转运体蛋白氨基酸序列系统 进化树显示：桑树与盐地碱蓬（Suaeda salsa）、毛果杨（Populus trichocarpa）蓖 麻（Ricinus Communis）等有较近的亲缘关系。半定量 RT-PCR 分析表明：MCAX-1 在桑树幼芽、嫩叶、根和幼花中表达量较高,在韧皮部、木质部和成熟果实中的 表达量较低；MCAX-1 在低温胁迫下的表达量减少， -1℃时几乎无表达，在干 旱胁迫下的表达量随着胁迫时间延长逐渐达到最大值之后再直线降低，在盐分胁 迫初期的表达量无变化，但胁迫 18d 时表达量明显降低。初步推测 MCAX-1 与桑 树的抗逆性能有一定关联。 2、桑树脱水应答蛋白基因 MRD22 的克隆，序列分析及诱导表达研究 从 已 构 建 的 桑 树 幼 叶 cDNA 文 库 得 到 了 一 个 编 码 桑 树 脱 水 应 答 （Dehydration-responsive Protein）基因的一段序列,通过 RACE 与 RT-PCR 结合首 次获得了这个基因的完整序列，命名为 MRD22（GeneBank 登录号：JQ804833）。 序列分析表明，MRD22 全长 1503bp，存在 334bp 的 5’端非翻译序列（5’-UTR） 和 563bp 的 3’端非翻译序列（3’-UTR），其开放读码框（ORF）长 606bp，编码 201 个氨基酸，预测蛋白质分子质量为 54.28KD，等电点为 9.35。构建的桑树和 其他植物基于脱水应答蛋白基因氨基酸序列系统进化树显示：桑树与毛杨果 （Populus trichocarpa）、蓖麻（Ricinus communis）、茶树（Camellia sinensis）、 棉花（Gossypium hirsutum）与海岛棉（Gossypium barbadense）等有较近的亲缘 关系。MRD22 在低温胁迫下的表达量出现不稳定状态；在干旱胁迫下，MRD22 的表达量随着胁迫时间延长逐渐达到最大值之后再直线降低；在盐分胁迫的情况 下，基因 MRD22 的表达量处于明显波动状态，但当在 264h 时表达量到达最大 值。初步推测 MRD22 与桑树的抗逆性能有一定关联。 关键词：Ca2+/H+反向转运体蛋白；脱水应答；基因克隆；序列特征；基因表达 Abstract：As a first step towards characterization of functional genes in mulberry,in this paper,we constructed a cDNA library from young mulberry leaves.Based on the research above,we cloned two important genes and carried out the analysis of their sequences.Furthermore,we conducted the functional verification of the two genes by the means of stress-induced method based on the prediction of their functions.The main results were summarized briefly as follows: Molecular cloning