妊娠期糖尿病大鼠胎肺血管发育及vegf pedf表达的研究-study on fetal lung vascular development and vegf pedf expression in gestational diabetes mellitus rats.docxVIP

妊娠期糖尿病大鼠胎肺血管发育及VEGF、PEDF表达的研究硕士研究生：巫福娟导师：罗先琼教授专业：儿科学中文摘要目的:探讨GDM（GestationalDiabetesMellitus,GDM）对大鼠胎肺血管发育的影响，为GDM的母婴综合治疗提供进一步的理论依据。方法:1、建立GDM动物模型：采用化学药物诱导法。选取20只SPF级Sprague-Dawley（SD）雌性大鼠，以雄雌1:2比例合笼过夜，次晨阴道涂片镜检发现精子者确定为怀孕，记为妊娠第0天。采用随机数字法将孕鼠随机分为2组：GDM组和对照组。GDM组于妊娠第6天一次性单侧腹腔注射1%STZ（溶于柠檬酸钠缓冲液，0.1mol/L,pH4.4）45mg/kg体重，孕鼠注射3天后有糖尿病表现且连续监测血糖均大于11.1mmol/L表示建模成功；对照组孕鼠在妊娠同一天同一侧进行一次性单侧腹腔注射等量柠檬酸缓冲液。两组孕鼠分别于妊娠第9天、第12天、第15天、第18天进行称重、测尾静脉血糖，妊娠第18天进行剖宫产术取出胎鼠肺组织。2、应用苏木素-伊红（HematoxylinandEosin,HE）染色观察两组大鼠胎肺形态结构发育情况，形态定量学方法分析肺泡数量、肺泡间隔厚度和平均每视野肺泡表面积。3、采用免疫组化SP法检测两组大鼠胎肺组织中血小板-内皮细胞粘附分子-1（Platelet-endothelialCellAdhesionMolecule-1,PECAM-1/CD31)、血管内皮生长因子（VascularEndothelialGrowthFactor,VEGF）及色素上皮衍生因子（PigmentEpithelium-derivedFactor,PEDF）的表达情况。14、SPSS18.0软件对数据进行相关统计学分析。结果:1、GDM组和对照组孕鼠症状表现及血糖变化：GDM组孕鼠在注射药物3天后开始出现多尿、多饮、多食、精神反应差、活动减少等糖尿病症状，对照组无明显上述糖尿病症状。GDM组孕鼠体重在妊娠第9天以后明显低于对照组孕鼠体重，差异有统计学意义（P0.05）；GDM组孕鼠血糖在妊娠第9天后明显高于对照组孕鼠血糖，差异有统计学意义（P0.05）。2、GDM组和对照组大鼠胎肺组织HE染色结果：光镜下，GDM组大鼠胎肺肺泡数目较少，肺泡腔结构小，肺泡间隔厚，周围结缔组织致密；对照组大鼠胎肺肺泡数目多，肺泡腔大，肺泡间隔薄，周围结缔组织少。形态定量学分析结果示：GDM组和对照组大鼠胎肺肺泡数分别为47.77±4.75个、55.67±7.85个；肺泡间隔厚度分别是8.60±1.28μm、6.93±0.57μm；平均每视野肺泡面积分别为189.75±33.12μm2、225.97±36.06μm2；GDM组大鼠胎肺肺泡数较对照组少，平均每视野肺泡面积较对照组小，肺泡间隔较对照组厚，差异均有统计学意义（P0.05）。3、GDM组和对照组大鼠胎肺组织CD31、VEGF及PEDF的表达情况：妊娠第18天时，大鼠胎肺组织还尚未见到完整血管腔结构形成。CD31主要定位于邻近肺泡腔的血管内皮间充质细胞胞膜上，VEGF和PEDF主要定位于肺支气管上皮细胞的胞浆或胞膜上，呈棕黄色。GDM组大鼠胎肺组织CD31、VEGF平均光密度值为0.428±0.016,0.423±0.015；对照组大鼠胎肺组织CD31、VEGF平均光密度值为0.340±0.006,0.382±0.012，GDM组大鼠胎肺组织CD31、VEGF平均光密度值较对照组高(P0.05）；GDM组大鼠胎肺组织PEDF平均光密度值为0.308±0.014；对照组大鼠胎肺组织PEDF平均光密度值为0.371±0.021，GDM组大鼠胎肺组织PEDF平均光密度值较对照组低，差异有统计学意义(P0.05）。对CD31、VEGF及PEDF两两因子的平均光密度值进行相关性分析结果示：对照组和GDM组大鼠胎肺组织中PEDF表达与VEGF及CD31均呈负相关（r=-0.787,P0.05,r=-0.793,P0.05;r=-0.837,P0.05,r=-0.831,P0.05)；对照组和GDM组大鼠胎肺组织中VEGF表达与CD31均呈正相关（r=0.813,P0.05;r=0.855,P0.05）。2结论:1、GDM动物模型建立成功；2、GDM大鼠胎肺呈发育延迟状态；3、GDM大鼠胎肺血管代偿性增生，VEGF和PEDF是大鼠胎肺血管增生的重要媒介因子。关键词血管内皮生长因子；色素上皮衍生因子；妊娠期糖尿病；胎肺3AstudyforthevasculardevelopmentandVEGF、PEDFexpressioninfetallungofthegestationaldiabetesratsAbstractObjectiveToexplo