杀配子染色体的表观遗传学分析-epigenetics analysis of gametocytic chromosomes.docxVIP

目录摘要ⅢAbstractⅣ第1章绪论-1-1.1杀配子染色体的研究概述-1-1.1.1杀配子染色体的发现-1-1.1.2导入到小麦基因组中的杀配子染色体-1-1.1.3杀配子染色体的致死效应-2-1.1.4杀配子染色体的作用机制-3-1.1.5杀配子染色体在小麦遗传和育种研究中的应用-3-1.2DNA甲基化的研究概述-5-1.2.1植物DNA甲基化机制-6-1.2.2DNA甲基化的生物学意义-7-1.2.3DNA甲基化与表观遗传学-8-1.2.4DNA甲基化的研究方法-8-1.3本课题的研究背景、研究目的和意义-10-1.3.1本课题研究背景-10-1.3.2研究目的和意义-11-第2章杀配子染色体的细胞学鉴定-13-2.1引言-13-2.2实验材料和方法-13-2.2.1实验材料-13-2.2.2实验方法-13-2.3实验结果和讨论-15-2.3.1实验结果-15-2.3.2讨论-19-2.4本章小结-21-第3章HPLC法检测杀配子染色体DNA甲基化水平-22-3.1引言-22-3.2实验材料及药品-22-3.2.1实验材料-22-3.2.2实验药品-22-3.2.3溶液配制-23-3.2.4主要仪器与设备-23-3.2.5实验分组-24-3.2.6数据处理和统计学分析-24-Ⅰ3.3实验方法-24-3.3.1实验材料处理方法-24-3.3.2HPLC法检测DNA甲基化水平-24-3.4实验结果与讨论-26-3.4.1实验结果-26-3.4.2讨论-28-3.5本章小节-29-第4章MSAP法检测杀配子染色体甲基化水平-30-4.1引言-30-4.2实验材料及药品-30-4.2.1实验材料-30-4.2.2实验药品-30-4.2.3溶液配制-31-4.2.4主要仪器与设备-31-4.3实验方法-32-4.3.1试验材料处理方法-32-4.3.2MSAP法测定DNA甲基化-32-4.4实验结果-35-4.4.1选择性扩增引物筛选结果-35-4.4.2数据处理和分析-36-4.4.3MSAP法实验结果统计分析-36-4.5讨论-41-4.5.1山羊草种质在小麦遗传背景中的存在及影响-41-4.5.2杀配子染色体双体附加系基因组的DNA甲基化水平及模式的遗传变异...-42-4.5.3DNA甲基化在杀配子机制中的作用-42-4.6综合讨论及展望-43-4.7本章小结-44-结论-45-参考文献-46-哈尔滨师范大学学位论文独创性声明-51-攻读硕士学位期间所发表的学术论文-52-致谢53Ⅱ摘要本研究以小麦为材料，分别是：中国春(CS)、中国春-2C2C杀配子双体附加系(CS-2C2C)、、农林26(NL26)、农林26-3C3C杀配子双体附加系(NL26-3C3C)。以不同浓度(10μmol/L，50μmol/L，100μmol/L)的5-氮胞苷(5-AC)进行去甲基化处理，探究DNA甲基化在杀配子作用机制中的作用。从以下3方面入手：(1)细胞学畸变率统计(2)HPLC法检测杀配子染色体的甲基化水平(3)MSAP法检测杀配子染色体的甲基化水平。主要研究结果如下：1.小麦甲基化调控染色体畸变的研究：杀配子双体附加系小麦的根尖在经过5-AC处理后出现了染色体断裂、微核、染色体桥、落后染色体等畸变形式。而CS、NL26这两种不含Gc染色体的小麦则不产生以上畸变形式。2.HPLC法检测小麦甲基化水平通过HPLC技术检测杀配子双体附加系的基因组DNA甲基化水平均高于普通小麦，所有小麦经过去甲基化处理后，基因组DNA甲基化水平均呈下降趋势。3.MSAP法检测小麦甲基化水平通过MSAP技术检测杀配子双体附加系CCGG位点甲基化水平均高于普通小麦，所有小麦经过5-AC处理后，DNA甲基化水平呈下降趋势，CCGG位点上发生了明显的甲基化模式变异。4.DNA甲基化在杀配子机制中的作用杀配子机制中的两个功能分别是断裂诱导功能和断裂抑制功能。以上实验结果表明DNA甲基化在杀配子机制中起到断裂抑制功能。去甲基化处理后，断裂抑制功能被抑制，断裂诱导功能处于优势地位，从而导致多种染色体畸变形式的出现。关键词5-氮胞苷；小麦；山羊草；杀配子染色体；染色体断裂；DNA甲基化；MSAP；HPLCⅢAbstractInthisstudy,ChinaSpring(CS),ChineseSpring-gametocidalchromosome2Cdisomicadditionline(CS-2C2C),Norin26(NL26),Norin26-gametocidalchromosome3Cdisomicadditionline(NL26-3C3C)weretreatingwith5-azacytidine(5-AC)atdifferentconcentrations