沙利霉素逆转人膀胱癌细胞株biu-87adm多药耐药的实验研究及机制探讨-experimental study on thalidomide reversing multidrug resistance of human bladder cancer cell line biu - 87 adm and its mechanism.docxVIP

目录摘要……………………………………………………………………………3Abstract………………………………………………………………………4前言……………………………………………………………………………6实验第一部分…………………………………………………………………9材料仪器………………………………………………………………………9实验方法………………………………………………………………………10实验结果………………………………………………………………………13讨论……………………………………………………………………………15实验第二部分…………………………………………………………………18材料仪器………………………………………………………………………18实验方法………………………………………………………………………19实验结果………………………………………………………………………21讨论……………………………………………………………………………25结论……………………………………………………………………………29参考文献………………………………………………………………………30致谢……………………………………………………………………………34综述……………………………………………………………………………351中英文缩写一览表FBSfetalbovineserum胎牛血清DMSOdimethy1sulfoxide二甲基亚砜EDTAEthylenedinitrilotetraaeetieAcid乙二胺四乙酸RPMll640roswellparkmemorialInstitute1640RlMll640培养基FCMflowcytometry流式细胞术PBSphosphatebufferedsaline磷酸盐缓冲液PIpropidiumiodide碘化丙啶SALSalinomycin沙利霉素ADMDoxorubicin/Adriamycin阿霉素MDRmultidrugresistance多药耐药SPSSstatisticalpackofsocialscience社会科学统计软件包2沙利霉素逆转人膀胱癌细胞株BIU-87/ADM多药耐药的实验研究及机制探讨摘要关键词膀胱癌沙利霉素阿霉素细胞周期凋亡多药耐药P-gp目的：探讨沙利霉素（Salinomycin）和阿霉素（Doxorubicin）及二者联合对体外培养膀胱癌耐药细胞株增殖的抑制作用，并探讨其可能的作用机制。方法：传代培养人膀胱癌多药耐药细胞株,实验时取对数生长期细胞。将具有浓度梯度的沙利霉素（0.1μM、1μM、5μM、10μM）和/或阿霉素（10μg/ml）分别作用于膀胱癌细胞，从细胞形态学、细胞周期、细胞凋亡、有关蛋白的表达等方面检测沙利霉素和阿霉素及二者联合对体外培养的膀胱癌耐药细胞的影响。用CCK-8法检测各实验组对膀胱癌细胞的体外增殖抑制率，流式细胞术检测膀胱癌细胞周期和凋亡的变化，细胞免疫化学检测各实验组细胞膜表面p-糖蛋白的表达的变化。结果采用SPSS18.0统计软件分析处理，分析采用设计资料的方差分析和单因素方差分析（One-WayANOVA）。结果：沙利霉素和阿霉素及两者联合均能明显抑制膀胱癌多药耐药细胞株的生长（P0.05）,且呈时间和剂量依赖性，中高剂量联合用药组表现为沙利霉素可恢复膀胱癌细胞对阿霉素的敏感性；流式细胞仪显示：1μM沙利霉素作用24h后G0/G1期细胞百分率由55.92±2.53%增加到64.23±3.23%；沙利霉素、阿霉素可诱导细胞凋亡，二者联合的细胞凋亡较单用组有显著提高；免疫细胞化学显示，细胞免疫化学可下调膀胱癌细胞膜表面P-糖蛋白的表达。结论：沙利霉素单用、联合阿霉素均对膀胱癌多药耐药细胞株具有显著的体外增殖活性抑制作用；沙利霉素使细胞周期受阻于G0/G1期，并诱导细胞凋亡，下调细胞膜表面P-GP蛋白的表达;这是沙利霉素恢复阿霉素对膀胱癌多药耐药细胞株敏感性的可能机制，给逆转膀胱肿瘤的多药耐药性提供了一种新手段。3ExperimentalstudyandmechanismofreversalofmultidrugresistancebySalinomycininhumanbladdercancercellsBIU-87/ADMAbstractkeywords:bladdercancer;Salinomycin;Doxorubicin;Cellcycle；apoptosis；Multidrugresistance；p-gp；【Objective】:ToexploretheeffectofSalinomycinandDoxorubicinonthegrowthofBladdercancercelllinesBIU-7/ADMinvit