水稻花粉特异性基因ospsg076启动子的克隆 表达载体构建与烟草遗传转化研究-cloning and expression vector construction of rice pollen specific gene os psg 076 promoter and study on tobacco genetic transformation.docxVIP

独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日摘要小麦和水稻都是世界上十分重要的粮食作物，小麦的花粉特异性基因PSG076在花粉的发育过程中特异表达，但目前对其功能尚不了解，研究PSG076基因启动子将有助于了解该基因对花粉发育以及小麦生长发育的调控作用。由于小麦是异源六倍体，基因组及其庞大，使得在小麦中研究TaPSG076基因的功能及其表达调控非常困难。通过比对，我们在水稻的基因组中找到了TaPSG076基因的同源基因OsPSG076。研究水稻的同源基因OsPSG076的启动子特性，可以为研究小麦TaPSG076基因启动子提供参考。通过数据库对比，在获得水稻OsPSG076基因的基础上设计特定引物，采用反向PCR技术，克隆到水稻OsPSG076基因翻译起始位点上游1266bp的启动子序列。通过PLACE数据库对所克隆的启动子进行生物信息学分析，发现该启动子除了具备启动子的基本元件TATA-box外，还含有多个与花粉特异性表达相关的元件如：AGAAA、GTGA等。为了验证所克隆到的水稻OsPSG076基因启动子的表达特性和深入分析其各顺式作用元件的作用，以pBI121为框架载体构建了包括OsPSG076基因上游6个不同长度的5端缺失启动子1258bp、986bp、678bp、379bp、334bp和236bp在内的6个双元表达载体：RP13-pBI、RP10-pBI、RP7-pBI、RP4-pBI、RP3-pBI、RP2-pBI。采用农杆菌介导转化方法，将6个双元表达载体转入烟草。对转基因植株通过提取全基因组DNA，利用GUS基因和不同长度启动子片段进行扩增，结果确认得到了0.2kb长度的启动子的转基因阳性植株。对该植株进行GUS检测，结果表明0.2kb长度的启动子片段不具备花粉特异性功能，也不具备OsPSG076基因的启动子的核心功能。其它长度启动子片段遗传转化研究正在进行中。关键词：小麦，水稻、OsPSG076启动子、GUS基因、烟草、农杆菌转化技术AbstractBothwheatandricearethemostimportantfoodcropsintheworld.PreviousstudyshowedthatTaPSG076isapollen-specificgenethatisexpressedinthedevelopmentalprocessofpollensinwheat.However,thefunctionofTaPSGO76remainedunknown.TheresearchofPSG076genepromoterswillhelpustounderstandthegeneregulationinpollendevelopmentandthegrowthofwheat.Sincewheathashexaploidgenomeanditisverylarge,theresearchofgenesandtheirpromotersinwheatwillbetime-consumingandheavytasks,andworkefficiencyisnothigh.Bycomparison,wefoundahomologousgeneofTaPSG076inthericegenomeandthegenewasdesignatedasOsPSG076.Therefore,thepresentresearchfocusedonisolationandfunctionalanalysisofOsPSG076genepromoter,theresultsofwhichshouldbehelpfulforunderstandingtheregulatingcharacterizationofTaPSG076genepromoterinwheat.Wesuccessfullycloneda1266bpupstreamsequence