水稻中一个新的cc-nb-lrr类r基因nrtp1的图位克隆与功能初探-preliminary study on the mapping cloning and function of a new cc - n b - lrr r gene nrt p1 in rice.docxVIP

Map-basedcloningandFunctionalstudyofNRTP1,anewCC-NB-LRRtypeRgeneinriceAuthor’ssignature:Supervisor’ssignature:ExternalReviewers:ExaminingCommitteeChairperson:ExaminingCommitteeMembers:Dateoforaldefence：杭州师范大学研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得杭州师范大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解杭州师范大学有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权杭州师范大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日致谢三年的研究生生涯转瞬即逝，在学业完成之际，我要向三年来给予我关心和帮助的每一位老师和同学表示感谢。首先，我要衷心感谢我的导师裴真明教授以及我的指导老师倪君老师！本论文的选题，研究过程，写作过程都得到了裴老师及倪老师耐心细致的指导和无私的帮助。同时，在生活和就业上，裴老师和倪老师也给了我很多建议和指导，为我今后的人生指明了方向。值此论文完成之际，谨向裴老师及倪老师表示崇高的敬意和真诚的感谢并祝愿裴老师及倪老师在学术领域取得更大的成就，培育更多的人才。其次，我要感谢517实验室其他老师的帮忙，尤其是吴飞华老师，教给我很多研究方法和人生哲理。还有裴晋珍，刘训言，柯丽萍，藤一波，吴晓梅，朱杉，蒋中浩等老师也给了我很多帮助。我还要特别感谢我的师兄崔浩强，陈维，张庶，师姐李安娜，沈燕霞，师弟曹孝强，买华晨，师妹刘圆、刘璐、徐媛媛、霍晓迎以及同年级同学周晓萍、俞瀚炳，姚丽琴这些年对我的陪伴和帮助，感谢你们带给我快乐的研究生生活！感谢我们植物点点长王嫚对我学习和生活的帮助！感谢我的室友沈颖、付文凤、陈亚楠对我生活上的照顾，是你们带给我欢乐，陪伴我度过了这段美好难忘的时光，真诚的谢谢你们！此外，还要感谢浙江大学吴平实验室为我的课题提供的材料和帮助。最后，再次感谢所有的老师和同学对我的帮助，谢谢你们！张岩岩2015年5月于杭州师范大学摘要通过对构建的kasalath背景的大规模EMS诱变的籼稻突变体库的筛选，我们鉴定到一个短根突变体nrtp1。最初鉴定到的nrtp1是一个杂合态的突变体，其自交F2代出现三种表型，其相应的纯合突变体表型严重，根部总长度不足0.5cm，且无法长成成熟植株，有纯合致死效应。遗传分析表明nrtp1突变体是由一个单基因控制的半显性突变体。Evansblue染色和根尖的树脂切片表明突变体在根尖生长点和侧根冠的细胞死亡严重。通过图位克隆的方法，我们将NRTP1基因定位于第12条染色体上，在基因（Os12g17410）ATG后1166bp处的碱基由A突变成G，使其编码的天门冬氨酸（Asp）突变为甘氨酸（Gly）。我们对突变位点进行酶切鉴定，证实该位点有突变。NRTP1基因编码一个典型的CC-NB-LRR类R蛋白，故我们推测该突变基因与抗病相关。抗病相关的基因的RT-PCR结果发现PR10a和PBZ1的表达量在突变体中最高，表明该突变基因确实与抗病相关。然后我们构建了NRTP1基因超表达载体，以及启动子融合GUS载体并进行了转基因实验，筛选转基因成功的植株进行种植，待收获种子后进行后续的功能研究。同时我们还构建了NRTP1基因与GFP融合表达载体，为以后更好的研究NRTP1基因的功能打下基础。关键词：短根突变体，图位克隆，NRTP1，CC-NB-LRR蛋白IAbstractThenrtp1mutantwasidentifiedinitiallyintheheterozygousstatebyscreeninganEMS-generatedpopulationofricecultivarkasalath.Theoffspringoftheoriginalmutantplanthadlongrootlikewild-type,mediumrootandshortroottherephenotypes,andthesegregatedratiowas1:2:1.Therootlengthofthehomozygo