蛇葡萄素抗肝纤维化的机制分析-mechanism analysis of ampelopsin against hepatic fibrosis.docxVIP

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2018-07-31 发布于上海
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蛇葡萄素抗肝纤维化的机制分析-mechanism analysis of ampelopsin against hepatic fibrosis.docx

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蛇葡萄素抗肝纤维化的机制分析-mechanism analysis of ampelopsin against hepatic fibrosis

2.1细胞培养392.2试剂的制备392.3引物设计及合成402.4提取总RNA412.5分光光度法测量RNA纯度412.6逆转录聚合酶链式反应422.7琼脂糖凝胶电泳442.8PCR产物分析442.9统计学方法443结果44RT-PCR产物的凝胶电泳结果44RT-PCR产物的光密度分析结果464讨论475结论47第六部分蛇葡萄素对HSC生成的细胞因子蛋白表达的影响研究..501实验材料501.1受试药物501.2细胞株501.3试剂501.4主要仪器设备511.5检测项目522实验方法522.1细胞培养522.2试剂的制备532.3提取总蛋白532.4酶标仪测定蛋白浓度542.5Westernblot技术542.6蛋白印迹产物分析562.7统计学方法573结果573.1蛋白印迹产物的结果573.2蛋白产物的光密度分析结果584讨论585结论59结语与展望60参考文献62附录64综述67致谢76攻读学位期间发表的学术论文目录77广西中医药大学研究生学位论文作者声明78个人简历79中英文缩略词汇表英文缩写英文全称中文名称AA260A280AnnexinV-FITCDEPCDMSODMEMEBElisaHSCLX-2MTTmRNAPBSPDGFPIAbsorbanceAbsorbanceat260nmAbsorbanceat280nmAnnexinV-FITCApoptosisDetectionKitDiethylpyrocarbonateDimethylSuLfoxideDMEMEthidiumbromideElisaHepaticStellateCellsHSC-LX-2MethylThiazolylTetrazoliumMessageribonucleicacidPhosptate-bufferedsalinePDGFPropidiumIodide光吸收值260nm波长处吸光值280nm波长处吸光值AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒焦碳酸二乙脂二甲基亚砜培养基溴乙锭酶联免疫吸附肝星状细胞人肝星状细胞四甲基噻唑兰信使核糖核酸磷酸盐缓冲液血小板衍生因子碘化丙啶RT-PCRReverseTranscription-polymerase逆转录聚合酶链式反应RNaseChainReactionRNAenzymeRNA酶SDSTBETGF-β1SDSTris-borate/EDTAbufferTGF-β1聚丙烯酰胺凝胶Tris-硼酸缓冲液转化生长因子TrypsinTrypsin胰蛋白酶TrypanBlueTrypanBlue台盼蓝T6HSC-T6大鼠肝星状细胞WesternblotWesternblot蛋白印迹中文摘要目的：研究蛇葡萄素抗肝纤维化的作用机制。方法：采用MTT法检测蛇葡萄素对人肝星状细胞(LX-2)、大鼠肝细胞(T6)增殖的影响。Elisa法检测LX-2、T6细胞生成的胶原蛋白(I、III、IV)、细胞因子(转化生长因子(TGF-β1)及血小板衍生因子(PDGF))含量。流式细胞仪检测在蛇葡萄素干预下T6细胞凋亡水平及周期变化。采用RT-PCR技术测定蛇葡萄素对T6细胞生成的胶原蛋白(I、III、IV)及细胞因子(TGF-β1、PDGF)mRNA表达的影响。蛋白印迹(Westernblot)技术测定蛇葡萄素对T6细胞生成的细胞因子(TGF-β1、PDGF)蛋白表达的影响。结果：蛇葡萄素作用于HSC48h后，MTT法结果表明，200.0μg/mL蛇葡萄素作用下LX-2细胞增殖明显低于细胞对照组(P0.05)，以抑制率在10%以内的蛇葡萄素浓度(50.0、33.0、22.0μg/mL)为无毒浓度。75.0μg/mL蛇葡萄素作用下T6细胞增殖明显低于细胞对照组(P0.05)，以抑制率在10%以内的蛇葡萄素浓度(50.0、25.0、12.5μg/mL)为无毒浓度；Elisa法结果表明，50μg/mL蛇葡萄素作用下LX-2细胞生成的I、III、IV型胶原蛋白、TGF-β1、PDGF含量明显低于细胞对照组(P0.05)，33μg/mL蛇葡萄素作用下LX-2细胞生成的I、III型胶原蛋白含量明显低于细胞对照组(P0.05)。50μg/mL蛇葡萄素作用下T6细胞生成的I、III、IV型胶原蛋白、TGF-β1、PDGF含量明显低于细胞对照组(P0.05)，25μg/mL蛇葡萄素作用下T6细胞生成的III型胶原蛋白含量明显低于细胞对照组(P0.05)；流式细胞仪检测细胞周期与调亡结果显示，50μg/mL、25μg/mL、12.5μg/mL浓度的蛇葡萄素作用下T6，与细胞对照组比较没有显著性差异(P0.05)；RT-PCR法结果表明，50μg/mL蛇葡萄素作用下T6细胞生成的胶原蛋白(I、III、IV)及细胞因子(TGF-β1、PDG