布病病原学及血清学课件.ppt

布病病原学及实验室诊断;;1 布鲁氏菌的生物学特性; 1.1 布氏菌的发现及分类;; 2013年，我省共分离出3株布鲁氏菌，均为羊3型；1991年以前流行优势种型为羊1、2型，1996年后则为羊1、3型 。 陕西省是以羊型菌为主，牛、犬种布鲁氏菌病的混合疫区，流行优势种随时间推移发生了变化。;1.2 形态和培养特征;鉴定布鲁氏菌的染色方法是：;; 营养条件高，生长缓慢，生长所需温度为20-40℃，最适温度为37 ℃.通常要经过4-6天，有的甚至要经过20-30天（双相培养基）才能长出菌落。;1.3 抵抗力;不 同 温 度 对 布 鲁 氏 菌 影 响;布鲁氏菌对消毒剂的抵抗能力;不同环境中的抵抗能力; 现已证明，布鲁氏菌对四环素最敏感，其次是链霉素，而对枯草杆菌肽、多黏菌素B、多黏菌素M素等有很强的抵抗力。;布氏菌的抗原、内毒素; 布氏菌的抗原成分十分复杂，存在A、M、G成分。A抗原对牛种布氏菌有特异性，M抗原对羊种布氏菌有特异性，G为两种菌共有。 与多种细菌存在共同抗原，因而有血清交叉反应。 布氏菌不产生外毒素，只产生内毒素，有致热、致炎作用，可导致休克。; 从种上来说，羊种毒力最强，猪种和牛种次之，犬种的毒力很弱，几乎不引起人致病。 由于菌种毒力等因素的不同，患病后的临床表现也不完全一样。羊种布鲁氏菌患者中毒症状严重，多有典型的发烧、多汗、头痛、虚弱、关节痛、肝脾及睾丸肿大等急性症状。;2.3 布病发病过程;细菌学检验; 实验室要求： 布氏菌是高致病性病原微生物，从危害程度来说为第二类病原微生物。布氏菌的分离培养要在生物安全二级以上实验室中进行。 培养样品采集 培养 菌株鉴定 种型鉴定 ; 3.1.1 布氏菌培养检查材料： 人或动物的全血 动物流产胎儿（胎儿的肝脏、肺、胃内容物） 动物脏器、动物胎盘、关节液、阴道分泌物等 新鲜乳汁 ;3.1.2 双相血培养瓶;双相血培养瓶培养方法;3.1.3 布氏菌培养特性 生长缓慢，延滞期长，尤其初代分离 需氧或微需氧菌，PH 7.2，牛种部分型别、绵羊附睾种布氏菌需在5-10% CO2环境中培养 菌落无色透明，光滑圆形，突起，均质，直径1-2mm 液体培养均匀混浊，无菌膜 粗糙型菌落较大，生长快;3.1.4 分离培养基;布氏菌特异的油滴样菌落;布氏琼脂布鲁氏菌菌落;血平皿 布氏菌菌落;布氏菌革兰氏染色;3.1.5 布氏菌菌株鉴定;3.1.6 布氏菌噬菌体;噬菌体对布氏菌的裂解;羊种布氏菌噬菌体裂解;PCR检测;;3.2.2 布氏菌的血清学诊断方法;虎红玻片凝集实验;方法：在玻片上加0.03ml被检血清，然后加入虎红平板抗原0.03ml，充分混匀，5min之内观察结果。 结果判定：出现可见的凝集反应就判为阳性；否则就为阴性。;注意事项：;原理：布氏菌侵入机体后，就会刺激机体产生特异性抗体，其可与相应的抗原发生特异性结合，在电解质的作用下，就会形成肉眼可见的凝集反应，也就是用已知抗原查未知抗体。;试管凝集试验;0.2ml血清;比浊管的制备;结果判定： 根据各管中上层液体的清亮度记录凝集反应程度（滴度），特别是50%清亮度（++）对判定结果关系较大，一定要与比浊管对比判定。 ++++ 液体完全透明，菌体成伞状沉淀或块状颗粒状沉淀，呈100%凝集。 +++ 液体近于完全透明，菌体成伞状沉淀，呈75%凝集。 ++ 液体略微透明，菌体呈较薄伞状沉淀，呈50%凝集。 + 液体不透明，管底有很不明显的伞状沉淀，呈25%凝集。 — 液体不透明，无伞状沉淀。 效价以产生50%凝集的血清最高稀释倍数为受检血清的效价。 血清对照为清亮透明无沉淀，抗原对照为均匀浑浊，两种对照管成立，才可判定试验管，否则重做。 人的诊断标准：滴度1︰100及以上或病程一年以上者滴 度为1︰50及以上为阳性 ;试管凝集实验的评价;注意事项;抗人球蛋白实验（Coomb’s）;; 试管凝集试验阶段 抗球蛋白反应阶段：吸取上项试验的可疑管和全部阴性管，4000转/分离心15分钟，反复洗涤3次。向各管中加入生理盐水0.5ml，混匀，再向各管中加0.5ml一定稀释度的抗球蛋白血清，将反应管置37℃温箱中20-22小时，取出室温放置2小时后判定结果。 判定标准同试管凝集试验 ;对照;注意事项;酶联免疫吸附试验（ELISA）;酶联免疫吸附试验注意事项;血清样本的采集和保存;谢谢大家！