接种分离纯化和培养技术课件.ppt

第四章 接种、分离纯化和培养技术;第一节 培养基制备技术 第二节 接种、分离纯化和培养技术 第三节 常用的微生物培养基——原理、制作和现象（自学）;第一节 培养基制备技术;二、培养基的类型;1、根据对培养基组成物质的化学成分是否完全了解来区分，可以将培养基分为 天然培养基、 合成培养基、 半合成培养基。;天然培养基是指利用各种动、植物或微生物的原料，其成分难以确切知道。用作这种培养基的主要原料有：牛肉膏、麦芽汁、蛋白胨、酵母膏、玉米粉、麸皮、各种饼粉、马铃薯、牛奶、血清等。用这些物质配成的培养基虽然不能确切知道它的化学成分，但一般来讲，营养是比较丰富的，微生物生长旺盛，而且来源广泛，配制方便，所以较为常用，尤其适合于配制实验室常用的培养基。这种培养基的稳定性常受生产厂或批号等因素的影响。;2）合成培养基 ;3）半合成培养基 ;2、根据培养基的物理状态来区分，可以分为： 固体培养基、 液体培养基 半固体培养基。;3、根据培养基的用途来区分，可分为： 选择培养基、 增殖培养基、 鉴别培养基等。;三、培养基制备的基本方法和注意事项 ;2、培养基的制备记录;3、培养基成分的称取;4、培养基各成份的混合和溶化;5、培养基pH的初步调正;6、培养基的过滤澄清;琼脂培养基可用清洁的白色薄绒布趁热过滤。亦可用中间夹有薄层吸水棉的双层纱布过滤。新制肉、肝、血和土豆等浸液时、则须先用绒布将碎渣滤去，再用滤纸反复过滤。如过滤法不能达到澄清要求、则须用蛋清澄清法。即将冷却至55~60℃的培养基放入大的三角烧瓶内，装入量不得超过烧瓶容量的1/2，每1000ml培养基加入1~2个鸡蛋的蛋白，强力振摇3~5分钟，置高压蒸汽灭菌器中、121℃加热20分钟、取出趁热以绒布过滤即可。 ;7、培养基的分装;分装容器应预先清洗干净并经干烤消毒，以利于培养基的彻底灭菌。每批培养基应另外分装20ml培养基于一小玻璃瓶中，随该批培养基同时灭菌，以为测定该批培养基最终pH之用。 ;8、培养基的灭菌;某些畏热成分，如糖类，应另行配成20%或更高的浓液，以过滤或间歇灭菌法消毒，以后再用无菌操作技术、定量加于培养基。???胶培养基亦应用较低温度灭菌。血液、体液和抗生素等则应以无菌操作技术抽取和加入于经冷却约50℃左右的培养基中。 琼脂斜面培养基应在灭菌后立即取出，冷至55℃-60℃时，摆置成适当斜面，待其自然凝固。;9、培养基的质量测试;用有关的标准菌株接种1~2管或瓶培养基，培养24~48小时，如无菌生长或生长不好。应追查原因并重复接种一次，如结果仍同前，则该批培养基即应弃去，不能使用。;10、培养基的保存;第二节 接种、分离纯化和培养技术;1、接种工具和方法;接种和分离工具 1.接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀;常用的接种方法有以下几种： ;2）三点接种 ;3）穿刺接种 ;4）浇混接种 ;5）涂布接种 ;6）液体接种 ;7）注射接种 ;8）活体接种 ;2、无菌操作;实验台面不论是什么材料，一律要求光滑、水平。光滑是便于用消毒剂擦洗；水平是倒琼脂培养基时利于培养皿内平板的厚度保持一致。在实验台上方，空气流动应缓慢，杂菌应尽量减少，其周围杂菌也应越少越好。为此，必须清扫室内，关闭实验室的门窗，并用消毒剂进行空气消毒处理，尽可能地减少杂菌的数量。 ;斜面接种时的无菌操作 (1)接种灭菌 (2)开启棉塞 (3)管口灭菌 (4)挑起菌苔 (5)接种 (6)塞好棉塞 ;二、分离纯化;1、倾注平板法;2、涂布平板法;1、倾注平板法;3、平板划线法;平板划线分离法 1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法;三、培养;2、培养方法;厌氧培养：也称“厌气培养”。这类微生物在培养时，不需要氧气参加。在厌氧微生物的培养过程中，最重要的一点就是要除去培养基中的氧气。一般可采用下列几种方法： ;a. 降低培养基中的氧化还原电位：常将还原剂如谷胱甘肽、硫基醋酸盐等，加入到培养基中，便可达到目的。有的将一些动物的死的或活的组织如牛心、羊脑加入到培养基中，也可适合厌氧菌的生长。 ;b. 化合去氧：这也有很多方法，主要有：用焦性没食子酸吸收氧气；用磷吸收氧气；用好氧菌与厌氧混合培养吸收氧气；用植物组织如发芽的种子吸收氧气；用产生氢气与氧化合的方法除氧。;c. 隔绝阻氧：深层液体培养；用石蜡油封存；半固体穿刺培养。 d. 替代驱氧：用二氧气碳驱代氧气；用氮气驱代氧气；用真空驱代氧气；用氢气驱代氧气；用混和气体驱代氧气。;第三节 常用的微生物培养基——原理、制作和现象;牛肉膏　　　　　　 5g蛋白胨