石榴花活性物质提取分离技术分析-analysis of extraction and separation technology of pomegranate flower active substances.docxVIP

摘要石榴花含有多酚类、黄酮类、三萜类等多种化合物，这些化合物具有诸多功效，如软化血管、生津化食、止泻、止痒、解毒、降温、抗胃酸过多等，近些年来，人们又发现石榴花具有抗氧化、抗糖尿病和护肝等多种功效，石榴花是一种极具研究和开发价值的天然植物资源。本课题以石榴花为原料，经干燥、粉碎、研磨，采用酶合超声提取技术，通过响应面优化法确定最佳提取工艺参数，从而最大限度提取出三类活性物质，然后经薄层层析和紫外分光光度法测其含量，再用大孔吸附树脂将活性物质进行分离纯化，最终研究结果如下：1.以单因素试验为基础研究酶解过程中酶添加量、酶解时间、乙醇浓度、超声频率以及超声时间对活性物质提取率的影响，并利用Minitab15中文软件响应面分析法进行优化，确定最佳的工艺条件为：酶添加量为0.05g，酶解时间为60min，乙醇浓度为80%，超声频率为36kHz，超声时间为20min。2．采用薄层层析及紫外分光光度法测定石榴花中三类活性物质的含量。将样品与对照品进行薄层层析分离并用紫外分光光度法测定各种条件下多酚类、黄酮类及三萜类三类化合物的吸光度，以确定最佳提取条件下各化合物的含量。通过薄层层析分离，确定了体积比为6：8：4：2的氯仿、乙酸乙酯、甲醇、甲酸为最佳展开剂；通过紫外分光光度法测定含量并结合所做正交试验的结果，确定了在此最佳实验条件下提取出多酚类、黄酮类及三萜类化合物的含量分别为58.6mg/g、68.1mg/g、11.0mg/g。3．通过静态吸附试验从十二种大孔吸附树脂中筛选出HPD-600型、AB-8型、D-101型三种吸附量大、解吸率高的大孔吸附树脂分别对多酚类、黄酮类及三萜类三类活性物质进行分离纯化。通过单因素试验和正交试验研究上样液pH、洗脱剂浓度、上样流速、上样浓度、洗脱剂用量等技术参数，然后采用逐级分离技术对三种活性物质分别进行纯化富集。结果表明：pH值为6.0，洗脱剂为90%乙醇溶液，上样流速为2.0BV/h，多酚浓度为2.02mg/mL，洗脱剂用量为3.0BV，在此工艺条件下可获得最大的多酚吸附量为93.85mg/g，回收率是80.1%；pH值为6.0，洗脱剂为90%乙醇溶液，上样流速为1.0BV/h，黄酮浓度为1.88mg/mL，洗脱剂用量为2.0BV，在此工艺条件下可获得最大的黄酮吸附量为69.93mg/g，回收率是92.5%；pH值为6.0，洗脱剂为90%乙醇溶液，上样流速为3.0BV/h，三萜浓度为0.8mg/mL，洗脱剂用量为3.0BV，在此工艺条件下可获得最大的三萜吸附量为61.57mg/g，回收率是84.2%。关键词：活性物质；酶合超声提取；薄层层析；分离纯化ABSTRACTTherearemanycompoundsinpomegranateflowers,likepolyphenol,flavones,triterpeneandsoon.Thesecompoundshaveallkindsoffunctions,suchassofteningvessels,digestingfood,relievingdiarrheaanditching,removingtoxicity,makinghypothermiaandresistingtoomuchgastricacid.Inrecentyears,antioxidation,curingdiabetesandprotectinglivercanalsobefoundedinpomegranateflowers,andthepomegranateflowersishighinresearchanddevelopment.Pomegranateflowersareusedasrawmaterialinthisdissertation.Afterdrying,crushing,grinding,weusetheenzymeandultrasonicextractiontechnologyandthemethodofresponsesurfaceoptimizationtodeterminethebestparameters,soastoextractpolyphenol,flavones,triterpenelargely.ThenwemeasureitscontentbytheTLCandultravioletspectrophotometry,andseparateandpurifytheseactivesubstancesinthelast.Thefinalresultsareasfollows:Basedonasinglefactorexperiment,westudytheeffectsofthequantityofenzyme,thetimeofenzym