生物钟基因npas2对肠癌细胞株dld-1生物学行为影响的基础与临床分析-basic and clinical analysis of biological clock gene npa s2 on biological behavior of intestinal cancer cell line dld - 1.docxVIP

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2018-08-01 发布于上海
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生物钟基因npas2对肠癌细胞株dld-1生物学行为影响的基础与临床分析-basic and clinical analysis of biological clock gene npa s2 on biological behavior of intestinal cancer cell line dld - 1

生物钟基因NPAS2对肠癌细胞株DLD-1生物学行为影响的基础与临床研究中文摘要目的本研究试图阐述人体生物钟基因家族的NPAS2基因在结肠癌细胞株DLD-1中的作用以及在肠癌中相关临床病理因素分析研究，讨论生物钟基因与肠癌发生发展的关系。通过体外实验，在肠癌细胞株中分析研究NPAS2的表达异常对肠癌细胞的生长增殖、细胞周期、细胞凋亡及侵袭迁移的影响。为治疗肠癌基因及周期性治疗提供依据。方法采用定量PCR方法检测108例肠癌患者的癌灶及癌旁组织中NPAS2表达量，分析其高/低表达与肿瘤临床病理因素的相关性。使用RNA干扰技术，敲除肠癌细胞株DLD-1中NPAS2基因表达，建立瞬时转染NPAS2-siRNA的DLD-1细胞株，用qRT-PCR法对NPAS2基因敲除进行鉴定。NPAS2基因沉默表达后：用CCK-8及免疫组化方法检测细胞生长、增殖的变化；用流式细胞术检测细胞周期变化情况；用TUNEL方法检测细胞凋亡的变化；使用细胞划痕技术观察细胞迁移能力变化，用Transwell方法检测细胞侵袭情况。结果108例肠癌患者中，肿瘤癌灶组织NPAS2的mRNA表达量比相应的癌旁组织减低（p0.05）；临床病理因素分析表明NPAS2的表达缺失与肿瘤的大小、TNM分期及远处转移相关（p0.05），而与患者年龄、性别、肿瘤位置、肿瘤分化、淋巴结转移及腹膜转移无关（p0.05）。在肠癌细胞株DLD-1中，分别瞬时转染干扰RNA：SiRNA-1#、SiRNA-2#，对照RNA：SiRNA-Con，成功获得实验组NPAS2低表达DLD-1/SiRNA-1#组、DLD-1/SiRNA-2#组及对照组DLD-1/SiRNA-Con，实验组的NPAS2表达量分别被显著下调（p0.05）。NPAS2表达沉默后，实验组细胞生长速度明显比对照组增快（p0.05），同时实验组细胞相对于对照组细胞多处于G2/M分裂期中文摘要生物钟基因NPAS2对肠癌细胞株DLD-1生物学行为影响的基础与临床研究（p0.05），但是NPAS2的表达缺失对两组的细胞凋亡无明显影响（p0.05）。细胞划痕实验证实NPAS2表达沉默后，实验组细胞迁移能力较对照组增强（p0.05）；Transwell实验同时表明实验组细胞侵袭能力较对照组增强（p0.05）。结论108例组织标本中，生物钟基因NPAS2在肠癌患者肿瘤组织中表达下调，其表达下调与肿瘤的大小、TNM分期及肿瘤远处转移相关。细胞实验表明NPAS2的表达缺失可使肠癌细胞处于S期及G2/M分裂期，减少G0/G1停滞，促进细胞生长。同时，NPAS2的表达沉默增强肠癌细胞的迁移及侵袭能力。但生物钟基因NPAS2的紊乱表达与肿瘤细胞的凋亡之间未见明显相关。通过临床及基础相关研究，我们证实生物钟基因NPAS2可能作为抑癌因子，参与了肠癌的发生发展。其可能作为肠癌的新的肿瘤治疗靶点及评估肠癌预后的标志物。关键词：生物钟基因；NPAS2；结直肠癌作者：韩野指导教师：赵宏副教授TheroleofNPAS2inDLD-1cellsanditsprognosisofcolorectalcancerAbstractObjectiveThisstudyistoclarifytheroleofcircadiangeneNPAS2inDLD-1andexploretheprognosisofcolorectalcancer.Wewilldiscusstherelationshipbetweentheoccurrenceandevelopmentofthecircadiangenewithcolorectalcancer.Invitroexperiments,theexprementswillbeplayedoutincolorectalcarcinomacelllinestoanalysisingtherelationshipabouttheabnormalexpressionofNPAS2withthebiologicalbehaviorsofcoloncancer,includingcellsgrowth,cellcycle,apoptosis,invasionandmigration.Ourstudywillprovideabasisforgene-therapyforcolorectalcancer.MethodsTumortissueswiththecorrespondingNATsweregotfrom108CRCpatients.AndthequantitativemeasurementofNPAS2mRNAexpressionwasperformedusingQuantitativereversetranscription-PCR(QRT-PCR