生物转化法制备11α17α-二羟基黄体酮的研究-study on preparation of 11α 17α - dihydroxyprogesterone by biotransformation.docxVIP

浙江工业大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的研究成果。除文中已经加以标注引用的内容外，本论文不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得浙江工业大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权浙江工业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于1、保密□，在年解密后适用本授权书。2、不保密□。（请在以上相应方框内打“√”）作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日生物转化法制备11α,17α-二羟基黄体酮的研究摘要皮质激素在甾体激素药物中所占分量很大，而C11位引入α-羟基是皮质激素生产工艺中的重要反应。经过几十年的发展，甾体药物的生产工艺正在由皂素时代进入植物甾醇时代，C11位α-羟基化所用的底物也发生了改变。11α,17α-二羟基黄体酮是新工艺路线中重要的中间体，但是关于该化合物的制备方法并未见专门报道，更没有工业化生产。本文利用赭曲霉生物转化方法，以17α-羟基黄体酮底物，在C11位引入α-羟基，得到11α,17α-二羟基黄体酮。本文的主要研究内容如下：通过实验，从几种有代表性的、具有C11位α-羟基化能力的微生物中优选出赭曲霉作为出发菌株，进行17α-羟基黄体酮的初步生物转化研究，并对产物进行检测，结合文献、液质联用、核磁共振等手段证明了产物就是11α,17α-二羟基黄体酮。并确定化验方法。用单因素法对发酵培养基组分、控制参数以及投料转化参数进行了优化，结果表明：以葡萄糖作碳源，酵母膏作氮源，磷酸盐用量控制在0.20%时转化结果较好；温度28±1℃，pH值6.4-6.7，在摇瓶条件下提高溶氧有利于转化；投料浓度0.5-1.0%，DMF作助溶剂，添加吐温-80作为乳化剂，产物转化率达到90%。对发酵下游工艺进行了探索，通过对底物和产物在不同溶剂中的溶解度进行研究，确定了后处理的工艺。提取溶剂用丙酮比较适合；产物的分离纯化采用氯仿和甲苯4:1(v/v)的混和溶剂。对小试优化后的工艺进行中试放大研究，连续三批收率大于80%，纯度达99%。通过研究，得到了目标产物11α,17α-二羟基黄体酮，收率80%以上，纯度达99%。该工艺可供进一步放大试产以及工业化生产。关键词：(11α,17α-二羟基黄体酮)，羟基化，赭曲霉，生物传化，甾体iMICROBIALTRANSFORMATIONOF16α,17α-DIHYDROXY-PROGESTERONEABSTRACTCorticosteroidsrepresentasignificantcomponentofsteroidhormonedrugs.AndC-11α-hydroxylationisanimportantreactionintheproductionprocessofcorticosteroids.Afterdecadesofdevelopment,moreandmoresteroiddrugproductionprocessesusephytosterolsinsteadofdioscin,thushydroxylatedsubstrateshaschanged.11α,17α-dihydroxy-progesteroneisanimportantintermediatesinthenewprocessroute,whichhasnotbeenspecificallyreportedorproduced.Inthispaper,17α-hydroxy-progesteroneisconvertedto11α,17α-dihydroxy-progesteronebyAspergillusochraceus.Themainworksareasfollows:Throughexperiments,weselectedAspergillusochraceusastheoriginalstrainfromseveralrepresentativemicroorganismswhichhaveabilityofC-11α-hydroxylation.Nextwestartedapilotstudyofbiotransformationof17α-hydroxy-progesterone,andtheproductsweredetected.Thepr