《基因诊断与基因治疗》课件.ppt

2、在遗传病检测中的应用 产前诊断 检测妊娠8－12周的绒毛DNA或羊水细胞 PCR诊断一系列遗传疾病 镰刀状细胞贫血的诊断 方法：－RFLP诊断 MstⅡ酶切识别序列：CCTNAGG 切割正常β链序列：CCTGAGG 不切割突变序列：CCTGTGG －ASO探针诊断 3、在肿瘤检测中的应用 原癌基因 生物正常细胞基因中编码关键性调控蛋白的癌基因 抑癌基因 一类抑制细胞增殖的基因，其失活可引起细胞转化。 两类基因协同调控，使细胞生长处于平衡状态。 癌基因激活变化及检测： 1、基因扩增：即染色体某区段基因拷贝数增加，或癌基 因的扩增。 检测方法： Southern 杂交 定量PCR 2、基因的过量表达：包括基因扩增基础上的过量表达及非 DNA水平的过量表达。 检测方法： Northern 杂交 RT-PCR 3、点突变： 检测方法为各种基于PCR的方法。 抑癌基因的检测：Southern PCR 大片段的缺失和点突变 *两个等位抑癌基因突变才能引起肿瘤，需检 出两个等位抑癌基因。 方法：RFLP结合PCR，进行缺失检测 点突变主要采用PCR 肿瘤标志物：指特征性存在于恶性肿瘤或由恶性肿瘤细 胞异常产生的物质或宿主对肿瘤反应而产 生的物质。 （1）酶类肿瘤标志物 （2）激素类标志物 （3）胚胎抗原 （4）特殊蛋白标志物 （5）糖蛋白类抗原 （6）血中癌基因蛋白 （7）唾液酸和唾液酸酰基转移酶 （8）多胺 免疫组化筛选提高检出率 法医学鉴定 针对人类DNA 遗传差异进行的个体识别和亲子鉴定。 常用技术: DNA指纹分析（VNTR） 短串联重复序列（STR）遗传特征分析 PCR-扩增片段长度多态性（AmP-FLP) PCR-mtDNA技术 根据可变串联重复序列（小卫星DNA）多态性 高度的个体特异性 DNA指纹（图谱）分析： ⑴、选择核心序列作探针，选在核心序列上无切割 位点的限制性内切酶，酶解样品， Southern blot得到DNA指纹图谱。 针对可变串联重复序列（VNTR） （VNTR是判断个体的遗传标志） ⑵、针对VNTR侧翼保守区序列设计探针，用PCR 对该区扩增，电泳得到个体之间长度不同的条 带图谱。（VNTR片段较长PCR不易扩增）。 所罗门的审判： 大家都听说过所罗门的审判这样一件故事： 两位妇人都声称自己是孩子的母亲，于是所罗门就命令一名侍卫把那个孩子带来，要用剑将其辟成两半分给他们两，结果假母亲 同意所罗门的判决，而孩子 真正的母亲却恳求侍卫 饶了孩子的性命，她 解释说：“把孩子给了 假母亲，总比让孩子 惨死好。”当然，真假 母亲也就水落石出了。 滴骨验亲法： 以生者的血滴在尸骨上，观察血能否浸入骨内，浸入的则被认为两者有血缘关系，在各种古籍中有多种记录。 三国时代（公园220—280年）谢承著《会稽先贤传》中的《以弟血滴兄骨》可能是记录此法的最早的史料：陈业的哥哥因海难不幸殒命，当时一同遇难的有五六十人，并且尸体都已严重腐败而无法辨认死者的身份。陈业就用刀刺破自己的手臂将血分别滴在尸骨上，发现其血液只能浸入一具尸骨，其余皆不能。陈业就这样确认其兄的尸骨。 合血法： 等到了明代，更是采用了“合血法”来识别亲权。明末清初的检验书籍中都有相同的记载：“亲子兄弟或自幼分离，欲相认识。难辨真伪。命各刺出血，滴一器内，真则共凝为一，否则不凝也。” 第二部分 基因治疗（gene therapy) 概念： 将外源正常基因导入靶细胞，以纠正或补偿因缺陷和异常基因引起的疾病，达到治疗目的。 导入的基因可以与缺陷基因对应、在体内表达具有特异功能的同源基因、也可以是与缺陷基因无关的治疗基因。 概念的扩展： 凡是采用分子生物学方法原理，将某种遗传物质转移 到患者细胞内，使其在体内发挥作用，达到治疗目的 的方法，都可称为基因治疗。 基因治疗策略: 总原则： －－直接补替缺陷基因 －－抑制非正常基因产物表达 －－间接调节机体本身免疫系统的抗病能力。 －－利用外源基因对病变细胞造成特异性杀伤 1