荧光原位杂交课件.pptVIP

荧光原位杂交（FISH） Fluorescence in situ hybridization;;;探针的发展;探针制备;;3.“寡核苷酸探针”为人工合成的DNA片段，一般长约20-50个bp（碱基）。可根据已知DNA或RNA序列合成精确互补的DNA探针；如不知核酸序列，可依据其蛋白产物的氨基酸顺序推导出核酸序列合成DNA探针。由于DNA自动合成仪的出现使探针的合成十分方便。 4.“RNA探针”制备的技术路线为：将一段含完整或部分基因的DNA片段插入重组质粒的多克隆位点——以内切酶在插入片段中某一适当部位或在插入片段下游的某一部位消化重组质粒——使之成为线性DNA——在相应的DNA依赖性RNA聚合酶催化下，以含目的基因的DNA片段为模板合成RNA探针。由于RNA探针为单链，杂交时不存在第二条链的竞争，所以其敏感性较经缺口平移标记的DNA探针要高。 ;探针的非放射性标记;切口平移法： 切口平移标记法先由胰DNA酶I在DNA双链上随机切口，大肠杆菌 DNA聚合酶I 作用以切口处开始，以另一条DNA链为模板，以4种三磷酸脱氧核苷酸为原料，沿切口水解5’端核苷酸和3’端修复加入标记核苷酸同时进行，切口平行推移，可均一标记DNA链。 （引物延伸法） 本法与切口平移法相似，都是利用DNA聚合酶来合成与模板互补的新的DNA链。由于DNA聚合必须从具有3’-OH的末端开始合成，因此与切口平移不同，引物延伸法需要一段与模序列互补的寡聚核苷酸作引物，将它与模板杂交，以提供3’-OH端。;探针类型;;;;8号染色体探针;FISH技术的优点;Applications of FISH;基因组结构研究;染色体精细结构变异分析;Viral Infections;Prenatal Diagnosis;