外源化学物致癌作用幻灯课件.pptVIP

目前主张采用几种方法组合试验，减少出现假阴性和假阳性的情况。 有人主张用Ames、小鼠细胞基因突变试验、SCE、体外细胞转化试验为一组，若这四种中有一种为阳性，则表明该物质致癌作用值得进一步探讨。 （二）细胞恶性转化试验 细胞恶性转化试验：是指受试物与正常细胞在体外接触，如有致癌作用，可使正常细胞形态、功能发生变化，发生与癌细胞相似的过程。 体外培养细胞观察内容：细胞生长自控能力、增殖速度、细胞形态、生化表型以及移植于动物体内形成肿瘤的能力等。 原理：癌细胞与正常细胞的不同是其核型的改变和因此而导致的生长自控能力的丧失。 细胞自控能力丧失可能导致细胞在离体培养时生长特性改变。 正常细胞：在液体培养时，克隆中的细胞排列有序、只能生长成单层； 癌细胞：贴壁生长的克隆失去接触抑制的能力，因而形成的“恶性转化”克隆中的细胞排列杂乱，重叠生长。 判断是否出现了细胞的恶变，须将转化的细胞植入试验动物体内，观察转化的细胞是否可发展成肿瘤。 恶变的细胞表现 细胞偏大，且大小不等； 核大而畸形，染色质深染而粗糙，核浆比例倒置，核膜粗厚，核仁增生而肥大； 核仁核胞浆因RNA增多而偏酸性，呈嗜碱性染色而偏蓝； 多见核分裂现象； 正常的接触抑制消失，它的克隆是多层细胞且排列紊乱； 生长表型改变。 常用的细胞种类 细胞选择的主要原则： 1、体外容易培养和传代，阴性细胞克隆背景较低； 2、细胞自发突变率低，或自发转化能力很弱； 3、已获得无限生长能力，但仍保持接触抑制而无致 肿瘤性。 原代细胞：如SHE细胞、人类成纤维细胞、小鼠皮肤或大鼠支气管上皮细胞等； 细胞系：BALB/C-3T3，C3H10T1/2，BHK-21； 病毒感染细胞：如RLV/RE细胞（劳舍尔白血病病毒感染的Fisher大鼠胚胎细胞）和SA7/SHE细胞（猿猴腺病毒感染的SHE细胞）。 优点：试验周期短，经济方便；一个细胞克隆或细胞巢就相当于一只受试物；受试物直接与靶细胞作用，便于控制剂量，不受吸收、代谢、分布的影响，并且可不受体内免疫系统等干扰；便于观察。 缺点：仍存在假阳性、假阴性等问题。 （三）癌基因、原癌基因及抑癌基因 DNA上原（前）癌基因、抑癌基因很可能是化学致癌物的靶分子。 ?癌基因（oncogene）：一类在自然或实验条件下能引起细胞恶性转化及癌变的基因。 ?多数癌基因表达产物都是细胞信号转导系统的组成成分，作为细胞生长因子和细胞生长因子受体、核转录因子或转录调节蛋白，促进细胞有丝分裂，参与细胞周期的调控等。 ?癌基因是化学致癌物作用的靶分子 ?在细胞癌变过程中发挥关健作用 ?指导合成的蛋白质能促成细胞恶性表型的形成 原癌基因（proto-oncogene）： 指机体内正常细胞所具有的能致癌的遗传信息，即癌基因的原型. ?在正常情况下，原癌基因呈静止状态， 对细胞无害且具有重要生物学功能，如生长因子、受体、信号分子、转录因子和细胞周期调节等，癌基因是化学致癌物作用的靶分子。 癌基因通常以原（前）癌基因的形式普遍存在于正常动物细胞的基因组内，原癌基因在进化过程中高度保守，它们在细胞中行使正常的生物学功能，对细胞增殖、分化和信息传递的调控起重要作用。 化学、物理或生物等致癌因素作用于细胞后，引起原癌基因突变并使之激活，转变成癌基因后才会导致细胞癌变。 原癌基因 癌基因 突变 致癌物 癌变 原癌基因与癌基因关系示意图 ?抑癌基因（anti-oncogene）：又称肿瘤抑制基因（tumor suppressor genes）、肿瘤易感基因（tumor susceptibility gene)，指对细胞生长、增殖和分化起负性调节的基因，即抑癌作用。 ?是正常细胞分裂生长的负性调节因子，其编码的蛋白质能够降低或抑制细胞分裂活性。 ?由于含化学致癌因素的作用，抑癌基因发生纯合子缺失或失活，可引起细胞的恶性转化而致癌。 抑癌基因失活 肿瘤细胞增殖失控 ? 正常情况抑癌基因具有多种多样的细胞功能，如P53 ?癌基因激活，导致肿瘤的阳性增殖，原癌基因突变为癌基因后通常过度表达 ?癌基因的两个等位基因中单个基因突变可以影响细胞表型 ?抑癌基因的产物能阻断肿瘤的细胞生长，抑癌基因突变后丧失其功能 ?抑癌基因的两个等位基因都必须失活才能改变细胞的表型 （四）基因表达调控异常与肿瘤发生 ?原癌基因、抑癌基因或其他基因表达、转录、翻译等过程的异常均引起基因表达异常，引发肿瘤。 ?基因表达的调控是一个多水平的过程，包括基因组、转录、转录后、翻译及翻译后等复杂过程。 肿瘤发病机制学说的两大学派： 1、基因学说：即癌变是由于基因的改变； 2、基因外学说：即基因表达调控失常，基因本身不一定有改变。