下调jak-stat信号通路中stat3的表达在食管鳞癌发生和治疗中的作用-role of down-regulating stat 3 expression in jak - stat signaling pathway in the pathogenesis and treatment of esophageal squamous cell carcinoma.docxVIP

中文摘要学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文未涉及任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。为本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已明确在文中标明。本人承担本声明的法律责任。学位论文作者：日期：年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文和相关作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：日期：年月日下调JAK-STAT信号通路中STAT3的表达在食管鳞癌发生和治疗中的作用研究生杨夏雯导师刘红涛副教授田芳教授郑州大学生命科学学院中国郑州450052摘要目的食管癌是胃肠道中最常见的恶性肿瘤之一。在中国，食管癌被认为是第四大最致命的癌症，对人类的身心健康存在着严重的威胁。食管癌的病理类型主要有两种，即食管鳞癌和食管腺癌。在我国，食管鳞癌是最主要的食管癌类型，大约占90%以上。食管鳞癌的发生以及发展是一个长期复杂多变的过程。与其它恶性肿瘤一样，食管鳞癌的发生是由多种基因、多种因素相互作用的结果，而且其发病机制也是一个多阶段的发展过程，但其分子机制尚不清楚，在诊断和治疗上也缺乏有效的手段。随着肿瘤分子靶向治疗的不断进展，深入研究食管鳞癌的发病机制，以及寻找新的肿瘤治疗靶标与标志物将具有非常重要的意义。信号转导与转录激活因子(signaltransducersandactivatorsoftranscription，STAT)是Fu等人在1992年研究干扰素诱导基因转录时首次鉴定的一个蛋白家族。STAT蛋白家族成员，参与了各种肿瘤细胞的发生发展过程，包括细胞周期进展、血管生成、细胞凋亡、侵袭、转移和免疫逃避。目前已发现STAT家族存在7个成员，包括STATl、STAT2、STAT3、STAT4、STAT5a、STAT5b和STAT6。作为STAT蛋白的家族成员之一，在人体中STAT3编码基因定位于第12号染色体上，是于1994年作为IL-6信号传递中的急性期反应因子而被纯化的。STAT3广泛地存在于不同类型的细胞和组织中，最初发现STAT3与肿瘤的关系是在v-Src转染的细胞系中发现了STAT3信号通路的激活，活化的STAT3蛋白I突变体能转化培养的成纤维细胞，最终使小鼠致癌；而阻断STAT3信号后，成纤维细胞的转化则受到抑制。在多发性骨髓瘤和头颈部肿瘤细胞的生长过程中发现了激活的STAT3信号，首次揭示了STAT3与人类恶性肿瘤的发生密切相关。己有较多文献报道了STAT3在头颈部肿瘤、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、卵巢癌、结直肠癌以及胃癌等多种恶性肿瘤中存在异常的表达，并参与了肿瘤的发生和发展。STAT3在多种人体肿瘤中存在异常的表达，而阻断STAT3信号通路能够抑制肿瘤细胞的增殖，并诱导肿瘤细胞凋亡。随着对STAT3信号通路研究的不断深入，STAT3信号通路在肿瘤的发生及发展过程中所扮演的角色越来越受到重视，以STAT3为靶点的治疗策略有望为某些恶性肿瘤的治疗开辟出一条新的途径。本文以小分子抑制剂stattic作为抑制STAT3磷酸化的药物，以研究STAT3在食管鳞癌的发生及发展中的作用。第一部分阻断STAT3信号对食管鳞癌细胞增殖和抗凋亡的影响方法1.利用Westernblotting检测多种不同来源的食管鳞癌细胞株中p-STAT3的激活情况。2.利用细胞毒性实验检测不同浓度（DMSO、1、3、10和30μM）的stattic在24h和48h对食管鳞癌细胞的毒性作用，并筛选出用于细胞增殖实验的stattic浓度。3.根据细胞毒性实验的结果选取用于细胞增殖实验的最大药物浓度，设置细胞增殖实验的stattic浓度（DMSO、1、2、3和4μM），检测不同浓度的stattic在不同时间点（0、24、48、72和96h）对食管鳞癌细胞的增殖抑制作用，并观察其抑制作用与STAT3表达是否相关。4.利用软琼脂克隆形成实验检测不同浓度stattic（DMSO、1、2、3和4μM）对食管鳞癌细胞的克隆形成能力的影响。利用Westernblotting检测不同浓度（DMSO、5、10和20μM）stattic对食管鳞癌细胞中的STAT3及相关基因表达的影响。利用Westernblotting检测不同浓度（DMSO、5、10和20μM）stattic+IL-6（30ng/ml）对食管