趋化因子mip-1α 紧密连接蛋白occludin在急性胰腺炎大鼠脑组织的表达-expression of chemokine mip - 1α tight junction protein ocludin in brain tissue of rats with acute pancreatitis.docxVIP

前言重症急性胰腺炎（severeacutepancreatitis，SAP）是临床常见危急重症，约占AP的20%～30%，其表现多变，死亡率达10%～20%；胰性脑病（pancreaticencephalopathy，PE）是SAP危险并发症之一，临床发病率为3%～27%，死亡率高达67%～100%。,但PE确切的发病机制目前尚不十分清楚。血脑屏障（blood-brainbarrier，BBB）由连续毛细血管内皮细胞、内皮细胞之间紧密连接（tightjunction，TJ）、完整的基底膜和血管周围星形胶质细胞足突形成的胶质界膜构成，对维持中枢神经系统内环境的相对稳定有重要意义，而脑血管内皮细胞间的紧密连接是实现其生理功能的主要结构基础，其中occludin既是形成TJ的主要结构成分，也是TJ的功能调节结构。SAP时血脑屏障通透性升高，导致有害物质通过血脑屏障引起脑损害，而其通透性的升高是否与紧密连接蛋白occludin有关，occludin表达的变化是否与胰腺的病变程度相关，这都有待于我们进一步研究。趋化性细胞因子（chemokines）是一类可诱导分泌的细胞因子家族，主要由组织细胞和免疫活性细胞产生，广泛表达与白细胞、单核细胞、巨噬细胞、T细胞和B细胞，通过与相应的受体结合介导对白细胞的趋化作用。AP的发病机制尚未明确，多项研究表明趋化因子在AP的发病中起重要作用。巨噬细胞炎性蛋白（macrophageinflammatoryprotein，MIP-1α）属于CC类趋化因子（β亚族），主要通过趋化和激活单核/巨噬细胞而发挥损伤作用，间接引起中性白细胞聚集。本研究通过AP大鼠模型，观察脑组织紧密连接蛋白occludin和MIP-1αmRNA水平、蛋白水平的变化及定位，以及与胰腺病变程度之间的关系，探讨PE脑损伤的可能机制。趋化因子MIP-1α、紧密连接蛋白occludin在急性胰腺炎大鼠脑组织的表达华中科技大学同济医学院附属协和医院消化内科硕士研究生：刘颖导师：刘俊侯晓华中文摘要目的：研究急性胰腺炎时脑血管内皮细胞紧密连接蛋白occludin和趋化因子巨噬细胞炎性蛋白（macrophageinflammatoryprotein，MIP-1α）表达的变化及其与胰腺病变程度之间的关系。方法：分别以浓度为0.5%、5%的胆酸钠逆行性胰胆管注射诱导轻症急性胰腺炎（MAP）和重症急性胰腺炎(SAP)大鼠动物模型，同时设假手术组（SO），进行胰腺病理评分，应用免疫组织化学、RT-PCR及Westernblot检测大鼠血脑屏障紧密连接蛋白occludin和MIP-1α在脑组织的定位、表达及mRNA的变化。结果：在SAP组大鼠，3h时occludinmRNA表达明显减少（1.01±0.18），6h时达最低值（0.93±0.19），12h（1.22±0.30）、24h（1.18±0.24）组有所回升，与假手术组(1.50±0.30)相比均有显著差异（P＜0.05），并且与胰腺组织损害程度呈明显负相关（Pearson相关系数为-0.627，P＜0.05）。WesternBlot与免疫组化结果均显示3h、6h时occludin表达减少，12h、24h时略有增加，但仍少于SO组；而MAP组occludin的表达与SO组无统计学意义；occludin的阳性染色位于脑血管内皮细胞。SO组、MAP组仅可见极少量的MIP-1α表达，免疫组化染色未见明显阳性着色；SAP3h即可见MIP-1αmRNA明显升高（0.84±0.16），6h时达顶峰（0.89±0.24），12h（0.45±0.12）、24h（0.42±0.13）小时开始下降，与SO组相比均有统计学意义（P＜0.05），其表达与胰腺病变程度有相关性（Pearson相关系数为0.678，P＜0.05）；WesternBlot与免疫组化结果与MIP-1αmRNA水平相一致，3h、6h时MIP-1α表达明显增加，12h、24h时开始下降，其阳性染色主要定位于小胶质细胞。结论：在SAP大鼠，脑血管内皮细胞间紧密连接蛋白occludin表达下降，其mRNA也呈下调趋势；与此同时MIP-1α表达上升，其mRNA也呈上升趋势，其表达变化均与胰腺病变有相关性；而MAP组变化不明显。关键词：急性胰腺炎；胰性脑病；血脑屏障；紧密连接蛋白；occludin；MIP-1αExpressionofchemokinesMIP-1αandtightjunctionproteinoccludininbraintissuesfromratswithAPDivisionofGastroenterology，UnionHospitalofTongjiMedicalCollege，HuazhongUniversityofScienceand