稳定高表达rassf1a基因的人胃癌sgc-7901细胞株的建立-establishment of human gastric cancer sgc - 7901 cell line stably expressing rassf 1a gene.docxVIP

原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工 作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的 地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包 含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共 同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。 作者签名： 日期： 年 月 日 关于学位论文使用授权说明 本人同意南华大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有 权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论 文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保留学位论文； 学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。 作者签名： 导师签名： 日期： 年 月 日 PAGE PAGE 10 目 录 主要英文缩略语索引…………………………………………………………1 中文摘要………………………………………………………………………2 英文摘要………………………………………………………………………3 论文正文………………………………………………………………………4 前言 …………………………………………………………………………4 实验材料及仪器 ……………………………………………………………6 实验方法…………………………………………………………………… 9 实验结果……………………………………………………………………19 讨论…………………………………………………………………………24 结论…………………………………………………………………………28 参考文献……………………………………………………………………29 综述……………………………………………………………………………30 硕士期间发表的文章…………………………………………………………41 致谢……………………………………………………………………………42 主要英文缩略语索引 (ABBREVIATIONS) 缩写词 3p 英文全称 short arm of chromosome 3 中文全称 3号染色体断臂 bp CCTCC cDNA base pair China Center for Type Culture Collection complementary DNA 碱基对 中国典型培养物中心 互补DNA DAG DEPC DMSO DNA DNMT EB mRNA OD diacylglycerol diethyl pyrocarbonate dimethyl sulphoxide deoxyribonucleic acid DNA methyltransferase ethidium bromide messenger RNA optical density 甘油二酯 焦磷酸二乙酯 二甲基亚枫 脱氧核糖核酸 DNA甲基转移酶 溴化乙锭 信使 RNA 吸光度 PAGE PBS PCR PVDF RASSF1A RNA RT-PCR polyacrylamide gel electrophoresis phosphate buffered saline polymerase chain reaction polyvinylidene difluoride RAS association domain family 1A ribonucleic acid reverse transcriptase-polymerase 聚丙烯酰胺凝胶电泳 磷酸盐缓冲液 聚合酶链式反应 聚偏二氟乙烯 RAS相关区域家族1A 核糖核酸 逆转录聚合酶链式反应 chain reaction SDS TSG sodium dodecyl sulfate tumor suppressor gene 十二烷基磺酸钠 抑癌基因 高表达RASSF1A基因的人胃癌细胞株SGC-7901的建立 硕士研究生：肖伟升 导 师：廖爱军 教授 中文摘要 目的：建立高表达RASSF1A人胃癌SGC-7901细胞株，为研究其在肿瘤细胞凋亡、细胞 周期阻滞、细胞增殖抑制等方面奠定基础。 方法：采用RT-PCR从人胃组织中扩增出人RASSF1A基因的全长cDNA，利用DNA重组 技术将其插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中获得重组质粒pcDNA3.1(+)/RASSF1A。利 用脂质体将重组质粒转染入人胃癌SGC-7901细胞株中，通过G418筛选阳性细胞克隆， 采用RT-PCR、Western Blotting检测RASSF1A的表达。 结果：1、酶切图谱分析及基因测序证明人RASSF1A基因已被完整、正确地插入到 pcDNA3.1(+)质粒载体中；2、人胃癌SGC-7901细胞株的G418最佳筛选浓度为500μg／ ml；3、R