17―β―雌二醇对猪卵母细胞体外成熟及体外受精胚影响.docVIP

17―β―雌二醇对猪卵母细胞体外成熟及体外受精胚的影响 　　摘要：为了观察17-β-雌二醇对猪卵母细胞体外成熟及体外受精胚的影响，选用屠体卵巢上的卵母细胞为试验材料，将其分为4组，分别在培养基中添加 0、25、50、75 μmol/L 17-β-雌二醇，体外成熟培养时间为36～44 h，受精胚培养时间为9 d。结果表明，在培养基中分别添加17-β-雌二醇0、25、50、75 μmol/L时猪卵母细胞体外成熟率分别为58.5%、67.1%、80.9%、64.5%，卵裂率分别为51.2%、56.5%、63.5%、59.2%，囊胚形成率分别为16.7%、24.2%、19.5%、24.0%。结果显示在培养基中添加50 μmol/L 17-β-雌二醇可提高猪卵母细胞体外成熟率至80.9%，提高体外受精胚的卵裂率至63.5%，但囊胚形成率以添加量为25 μmol/L的组最高，说明添加17-β-雌二醇可提高猪卵母细胞成熟率、卵裂率以及囊胚率。 　　关键词：17-β-雌二醇；卵母细胞；体外成熟；体外受精；胚胎培养 　　中图分类号：S828.3 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）22-5660-02 　　Abstract： For observing the effect of 17-β-E2 on the porcine oocytes maturation and fertilized embryos’ development in vitro， the porcine oocytes collected from prepubertal gilts’ ovaries were cultured in maturation medium which added different concentration 17-β-estrodiol （0、25、50、75 μmol/L） for 36～44 hours. The fertilized eggs were cultured for 9 days. The results showed that the maturation rate of each addition was 58.5%， 67.1%， 80.9%， 64.5%， respectively. The cleavage rate was 51.2%， 56.5%， 63.5%， 59.2%， respectively， and the blastocyst rate was 16.7%， 24.2%， 19.5% and 24.0%， respectively. It indicated that the addition of 17-β-estrodiol could improve maturation rate， cleavage rate and blastocyst rate， and the maturation rate cleavage rate of 50 μmol/L addition were higher than the other 3 groups， but the blastocyst rate of 25 μmol/L addition was higher than the other groups. 　　Key words： 17-β-estrodiol；porcine oocytes； in vitro maturation； in vitro fertilization； embryo culture 　　自Mattiol等[1]用屠体的卵母细胞获试管猪以来，卵母细胞的体外成熟培养已经取得了较大的进展[2]。目前，研究者大多从屠宰场废弃卵巢中获取卵母细胞，但随着中国养猪业的发展，生猪出栏时间从原来的5个月缩短到3个月，而3月龄的母猪尚未性成熟。因此，如何进一步提高卵母细胞的成熟效率，为胚胎工程技术准备更多优良的成熟卵母细胞就日益成为研究者所关注的焦点[3，4]。 　　雌二醇（E2）是体内主要由卵巢成熟滤泡分泌的一种天然雌激素，能促进和调节性器官及副性征的正常发育，临床用于卵巢机能不全或卵巢激素不足引起的各种症状。本试验在猪卵母细胞的成熟培养基中添加不同浓度的雌二醇，以研究其添加量对卵丘细胞体外成熟率的影响及对体外受精胚发育率的影响，旨在为胚胎工程技术的发展提供参考。 　　1 材料与方法 　　除特别标识外，所有试剂均购自Sigma公司，耗材为NUNC公司产品。 　　1.1 卵巢的采集、运输、清洗及修剪 　　本试验所用卵巢来自武汉市中粮肉食品加工厂屠宰场。剪下刚屠宰的直径约1.0～2.5 cm、卵泡颜色清亮、形态正常（无过大、病变卵泡）且手感