BCPHAFGrhBMP2复合人工骨修复骨缺损实验研究.docVIP

BCPHAFGrhBMP2复合人工骨修复骨缺损实验研究 　　[摘要]目的研制理想的能较快修复大段骨缺损的人工骨材料。方法将重组骨形态发生蛋白－2(rhBMP－2)/透明质酸钠－纤维蛋白复合凝胶(HAFG)缓释体系和多孔双相钙磷陶瓷(BCP)结合研制成BCP/HAFG－rhBMP－2人工骨，并分别将BCP/HAFG－rhBMP－2、BCP/rhBMP－2和BCP/HAFG人工骨进行兔桡骨大段骨缺损修复的对比研究。术后分别行大体、放射学、组织形态学及生物力学测试。结果试验中第12周与第2周相比较，3组碱性磷酸酶(AKP)值下降情况分别为BPC/HAFG－rhBMP－2组降低了65.13％，BPC/BMP－2组降低了71.03％，BPC/HAFG组降低了58.59％。组织学及扫描电镜观察显示：12周时BPC/HAFG－rhBMP－2组材料已基本被成熟骨组织所代替，新骨结构与宿主骨无差别，而BPC/HAFG和BPC/rhBMP－2组骨小梁结构疏松细小，材料仍未完全被降解，材料与骨组织间形成较大间隙。术后12周时3组材料植入部位骨组织极限抗压强度分别为：BCP/HAFG－rhBMP－2组(538±12.7)N、BCP/BMP－2组(368±24.0)N、BCP/HAFG组(256±8.4)N。BPC/HAFG－BMP－2复合型人工骨较BCP/BMP－2及BCP/HAFG人工骨具有更强、更持久的诱导成骨活性。结论BCP/HAFG－rhBMP－2人工骨能更快促进长骨大段骨缺损的修复，是一种较理想的人工骨材料。 　　[关键词]骨和骨组织；骨移植；生物力学 　　[中图分类号]R318.08　[文献标识号]A　[文章编号]1671－7562(2007)04－0265－06 　　 　　为寻找理想的人工骨组织材料，本实验将多孔双相钙磷陶瓷(BCP)同重组骨形态发生蛋白－2(rhBMP－2)/透明质酸钠(HA)和纤维蛋白复合凝胶(HAFG)缓释体系结合，制成BCP/HAFG－rhBMP－2人工骨材料，进行修复长骨大段骨缺损的实验。 　　 　　1　材料与方法 　　 　　1．1　人工骨材料的制备 　　(1)BCP由东南大学材料科学与工程学院生物材料研究组研制提供。该BCP材料呈白色多孔状结构，孔道彼此连通，孔径约为300μm，孔隙率为80％。试验中将BCP制成长10mm，直径4mm圆柱体。(2)BCP/HAFG－rhBMP－2人工骨的制备：在BCP植入前用特制双管注射器将混有等量rhBMP－2的HAFG复合凝胶缓慢滴注入BCP，使其在BCP表面涂布均匀。待复合凝胶由流体状变为灰白色半钢性状态时植入缺损部位。同法制备并植入BCP/HAFG人工骨。(3)BCP/rhBMP－2人工骨的制备：利用部分真空吸人法将rhBMP－2和BCP结合在一起。制成的每支人工骨中约含rhBMP－2为1mg，植入前人工骨在密封包装下环氧乙烷气体消毒24h。 　　 　　1．2　实验动物及分组 　　新西兰兔60只，体重2.5－3.2kg，雌雄不限。随机分为3组：A组为BCP/HAFG－rhBMP－2组；B组为BPC/rhBMP－2组；C组为BPC/HAFG组。 　　 　　1．3　实验方法 　　用质量分数为3％的戊巴比妥钠(1ml?kg-1)静脉麻醉后，每兔随机选用左右侧前肢，经剃毛、消毒，取桡侧切口切开皮肤及皮下组织，显露桡骨干中段，用单片小锯锯下10mm连带骨膜骨段，然后按组分别植入相应人工骨材料。术后给予庆大霉素10000 u?kg-1，每日2次肌肉注射，连续注射3d。常规条件下喂养观察。 　　 　　1．4　大体观察 　　观察动物的饮食、活动、伤口反应，术后第2、4、8、12周分批处死动物并取材，观察植入材料的表面、局部成骨及炎症反应等情况。 　　 　　1．5　X线观察 　　术后第4、8、12周摄片，由3人盲法按照Lane－sandhu X射线评分标准进行评分。 　　 　　1．6　碱性磷酸酶(AKP)活性检测 　　术后第2、4、8、12周3组各取5只动物，全麻后从心脏抽血3 ml离心，使用AKP试剂盒行血清AKP活性测定。 　　 　　1．7　桡骨生物力学检测 　　术后12周时，每组各取5个标本及正常桡骨标本作力学强度测试。以材料植入处为中心截取桡骨长约1.4 cm。经牙托粉两端包埋后，置于MTS－858minibionixⅡ型生物力学测试机上进行垂直压缩试验。加载速度为1mm?min-1，最大位移设定3mm。每隔0.1s记录一次数据。 　　 　　1．8　组织病理学观察 　　将每次所获取的桡骨标本作好标记置于10％甲醛中固定24h后，经EDTA脱钙、梯度酒精脱水、石蜡包埋，沿桡骨纵轴连续切片，厚度为6μm，HE染色，光学