17β雌二醇对大鼠腹腔巨噬细胞活性影响.docVIP

17β-雌二醇对大鼠腹腔巨噬细胞活性的影响 　　[摘要]①目的：研究17β-雌二醇（Estradiol, E）对大鼠腹腔巨噬细胞的影响。②方法：以大鼠腹腔巨噬细胞为对象，采用吞噬中性红法，观察不同剂量、不同时间雌激素处理后腹腔巨噬细胞的吞噬功能的变化。并HE染色进行形态学观察。③结果：剂量为10-4、10-6可引起腹腔巨噬细胞吞噬功能抑制，该作用在E处理后的2h、6h、16h均明显，随时间延长，作用增加。剂量10-8可增强吞噬功能。并有形态学变化。④结论：17β-雌二醇具免疫增强和免疫抑制双重功效，并随时间、剂量大小有变化。 　　[关键词]17β-雌二醇　腹腔巨噬细胞　免疫抑制　免疫增强 　　中图分类号：R4 文献标识码：B 文章编号：1002－6908（2007）0920152－01 　　 　　雌二醇（Estradiol,E）是具有广泛调节作用激素之一，对免疫系统的影响颇受研究者的注目。临床观察，雌激素与一些自身免疫性疾病和乳腺癌等肿瘤的发生有着较密切的关系[1]，以及用雌激素的替代疗法可治疗某些疾病等，这些都提示雌激素对免疫系统的维持和调节方面可能起着一定的作用。巨噬细胞(macrophage,M)是机体免疫体系中重要的免疫效应细胞，具有非特异性直接清除各种异物，杀伤病原体和肿瘤细胞的功能，并具有抗原提呈作用[2]。本实验选用大鼠腹腔巨噬细胞进一步研究在离体条件下雌激素对其功能的影响。以试图发现其在免疫调节中的作用及发现新的治疗靶点。 　　 　　一、材料和方法 　　 　　（一）实验材料。动物：6周龄雄性Wistar大鼠，（购于本校实验动物中心）。 　　（二）1.腹腔巨噬细胞的收集。大鼠腹腔注射2%的无菌淀粉15ml，第三天断头处死大鼠，用冰冷D-Hanks液10ml冲洗腹腔2次，合并冲洗液，离心，去上清，D-Hanks液洗涤3次后，用含10%FCS的RPMI-1640培养液调细胞浓度为2×106/ml，经台盼蓝染色检查细胞活性大于95%。2.E对腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响（中性红法）。将该上述细胞悬液加96孔板，每孔100ul。置37℃贴壁2h,去掉未贴壁细胞，用D-Hanks液洗3次后，分别于各孔加入E和RPMI-1640培养液，使E终浓度为10-4，10-6，10-8，置37℃、5%CO2恒温箱分别孵育2h，6h,16h后，弃去上液，每孔加入中性红100ul，37℃作用30min后，用D-Hanks液洗3次，加100ul细胞溶解液，置4℃冰箱过夜，上酶联免疫测试仪于490nm处测各孔OD值。3.腹腔巨噬细胞形态观察。将盖玻片加于96孔板，再加入细胞悬液每孔190ml,分别加1640培养液、10-4的E、10-6E、10-8E补足终体积200ul，置37℃，5%CO2恒温培养箱孵育16小时后，取出盖玻片进行HE染色。 　　（三）统计学处理。所有数据用X±S表示，结果均用SPSS11.0软件LSD检验。 　　 　　二、结果 　　 　　雌二醇对腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响结果见表。E1：10-4、E2：10-6与贴壁的巨噬细胞作用后，使巨噬细胞吞噬中性红的能力明显减弱，与对照组比较具有高度统计学意义（P0.01）。E3：10-8使巨噬细胞吞噬中性红的能力明显增强，与对照组比较具有高度统计学意义（P0.01）。并均随时间延长作用增强，具有统计学意义（P0.01）。 　　 　　注：与空白组比较，?~P0.01;组间比较,△P0.01 　　本实验HE染色结果显示：E1：10-4、E2：10-6与贴壁的巨噬细胞作用后，被抑制的巨噬细胞胞体小。10-8的E改善巨噬细胞吞噬功能，形态学观察发现，10-8的E处理的巨噬细胞 　　 　　三、讨论 　　 　　近年来内分泌免疫调节日益受到重视，雌二醇（Estradiol,E）对免疫系统的影响颇受研究者的注目。如张修武等发现雌二醇能够诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生典型的细胞凋亡[3]。被认为与肿瘤及自身免疫性疾病的发生有密切关系[4 ～5]。巨噬细胞是机体免疫体系中重要的免疫效应细胞 [6]，本实验选用腹腔巨噬细胞体外吞噬中性红的方法来观察。雌二醇对巨噬细胞的吞噬功能的影响。ＭＴＴ法来观察E在体外对巨噬细胞的活性的影响。结果可见，10-4浓度的雌二醇可显著抑制大鼠腹腔巨噬细胞吞噬活性，并随时间延长作用明显。10-6E在20小时时抑制作用表现明显。另有研究报道雌二醇可增强单核吞噬细胞系统功能，增强巨噬细胞的吞噬作用[7]。本实验结果显示：10-8的17β-雌二醇增强巨噬细胞吞噬活性。并且10-8的E处理的巨噬细胞胞体变大、表面突起增多，细胞伸展率提高。 　　免疫调节的现代学说包括对于免疫系统的一系列复杂的正和负的影响，在评价雌激素作为免疫调节物的任何作用时，既