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αL岩藻糖苷酶研究进展 　　【关键词】α-L-岩藻糖苷酶；水解酶；肝癌；诊断 　　【中图分类号】R446.1【文献标识码】A【文章编号】1044-5511（2011）11-0467-01 　　 　　α-L-岩藻糖苷酶（α-L-Fucosidase,AFU）是一种溶酶体酸性水解酶，分类名为α-L-岩藻糖苷岩藻糖水解酶（EC3.2.1.51）。基本生理功能是催化含岩藻糖基的低聚糖、糖肽、糖蛋白、糖苷的分解代谢。近年来，人们对AFU的研究日益增多，AFU水平的变化与多种疾病相关，特别是在原发性肝癌(PHC)的诊断中应用广泛。有关AFU的生物学特性、检测方法及临床应用等研究进展综述如下。 　　1 AFU的生物学特性 　　AFU是一种溶酶体酸性水解酶，广泛分布于人体各种组织、细胞及体液中，如脑、肝、肺、胰、肾、胎盘组织、血清、尿液、唾液及泪液等均含有AFU，其中以肝、肾等组织活性最高，细胞内的AFU主要位于溶酶体内。健康人血清AFU的相对分子质量为（270～390）×103，白细胞AFU的相对分子质量为（30～130）×103，肝脏AFU的相对分子质量为（220～240）×103，肝脏AFU在体内的生物半衰期为10～14d［1］。用神经氨酸苷酶处理后，血清AFU相对分子质量下降到（37±4）×103，而且它们在等电聚焦电泳中行为出现显著改变，在pH3.8～5.9范围酶的活性基本消失，而在pH6.0～7.2范围酶的活性增高。研究表明，脑与肝AFU具有抗原一致性，用肝AFU制备的抗体IgG可与纯化的血清AFU发生免疫沉淀法应；血清AFU的反应最适pH在4.8左右，在pH6.1处可出现一个次要的“最适”pH峰，与脑、肝AFU的pH反应曲线类似，而且三者的Km值比较接近，提示血清和脑、肝AFU之间存在抗原特性和动力学特征的一致性。 　　2 AFU的检测方法 　　二十多年来，随着对AFU的深入研究，AFU的检测方法从放免法、荧光法、终点显色法到速率法（连续监测法）的不断更新。 　　2.1 放免法:仪器条件要求高，样品及试剂需特殊处理，目前多不再使用。 　　2.2 荧光法 :利用AFU水解4-甲基伞型酮α-L-岩藻吡喃糖苷释放4-甲基伞型酮，用碱性缓冲液终止反应，并使产物呈现荧光，用360nm或365nm激发波长和400nm或448nm发射波长检测荧光强度，对照不同浓度4-甲基伞型酮制备的标准曲线求的酶活性。此法敏感性高，但对仪器条件要求较高，不适合自动化检测。 　　2.3 终点显色法: 以4-硝基苯α-L-岩藻吡喃糖苷为底物经AFU水解释放4-硝基苯酚（4-NP）后，用碱性缓冲液终止反应，使4-NP呈显著黄色，在405nm波长比色。用纯4-NP作标准，利用标准曲线或4-NP的摩尔吸光度计算出AFU活性。本法简便、设备要求不高，但由于酶底物本身的抗干扰性差，基质效应明显，不能解决血清黄疸和溶血、脂血等因素对测定结果的影响，且操作较为繁琐，不适合自动化检测。 　　2.4 速率法:（连续监测法） 血清中AFU催化2-氯-对硝基酚α-L-岩藻吡喃糖苷（CNP-F）水解生成2-氯-对硝基酚（CNP）在405nm或410nm波长监测CNP的生成速率，计算出AFU活性。本法操作简便，测定时间短，灵敏度及抗干扰性都有所提高，适用于各种自动分析仪器，便于临床推广。根据底物的不同，又可分为PNP法、CPNP法、M-G-CPNP法。PNP法底物为对硝基苯α-L-岩藻吡喃糖苷，灵敏度一般，对溶血、黄疸仍表现出一定的基质效应，精密度也较差。CPNP法是90年代发展起来的方法,采用氯化对硝基苯α-L-岩藻吡喃糖苷作底物，灵敏度和精密度较PNP法有了很大的改善，但仍未完全解决溶血、黄疸及脂血的基质效应。M-G-CPNP为新型底物，其灵敏度、精密度、抗干扰性及试剂的稳定性都很高，适合自动化检测，是当前最先进、应用最广的检测方法。 　　3 AFU的临床应用 　　3.1 原发性肝癌: 原发性肝癌(PHC)是一种世界范围内恶性程度高、进展快、预后差、侵袭性强的恶性肿瘤［2］。Deugnier等报道，在肝癌患者血清中AFU活力升高，具有较高的特异性和敏感性。近年来许多学者研究发现，PHC患者血清AFU活性明显增高，认为AFU将成为PHC诊断又一有用的指标［3-5］。虽然目前对原发性肝癌患者血清AFU活性升高的机制尚不清楚，可能与肝细胞合成AFU增加，并大量释放入血有关，也可能与AFU降解减缓以及含岩藻糖酶的糖蛋白和糖脂，寡糖代谢紊乱有关。研究表明，血清AFU活性升高与AFP无相关性，AFP阴性的PHC病人有58%-81%血清AFU活性升高。血清AFU升高幅度和阳性率与病灶的大小无明显关系，病灶3cm的病组血清AFU升高的阳性率为70.8%-80.0%，明显