α玉米赤霉醇对体外培养成骨细胞增殖影响.docVIP

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α玉米赤霉醇对体外培养成骨细胞增殖影响

α玉米赤霉醇对体外培养成骨细胞增殖影响   【中图分类号】R96 【文献标识码】 A 【文章编号】1672-3873(2011)03-0002-02   【摘要】目的 观察α-ZAL对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞的作用。方法 酶消化法分离培养SD乳鼠颅盖骨成骨细胞;应用MTT法测定成骨细胞增殖。结果 α-ZAL能促进大鼠颅骨成骨细胞增殖,最佳浓度为10-7mol/L和10-10mol/L。结论 α-ZAL可促进成骨细胞增殖和分化。   【关键词】α-玉米赤霉醇;细胞培养;成骨细胞   Effect of α-ZAL on osteoblasts cultured in vitro   Gao Wen,Duan Fei1, Li Shaochun , et al.   (College of Basic Medical Science of Hebei University,Baoding 071000,China)   [Abstract]Objective: To investigate the effect of Effect of α-ZAL on osteoblasts cultured in vitro. Methods: Osteoblasts were obtained from the calvaria of newborn SD rats with enzymatic digestion method. The effect of α-ZAL on the proliferation of osteoblasts was determined by MTT assay. Result: α-ZAL increased osteoblastic proliferation at concentration of10-7mol/L, 10-10 mol/L. In this two concentration, they can inhibit osteoblast death.α-ZAL can promote the proliferation of osteoblasts.   [KEY WORDS] α-ZAL; cell culture; Osteoblast;      α-玉米赤霉醇(α-ZAL)是天然内源性植物激素玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)的还原产物,属于二羟基苯酸内酯类化合物,具有促生长效应,与高等植物的发育有关,广泛存在于豆类、谷物等多种植物中[1]。α-ZAL结构与雌激素非常近似,初步的实验研究[2-3]发现,它具有与雌二醇类似的抗动脉粥样硬化及抑制组织因子分泌等作用,可产生心血管保护效应,同时对于由切除卵巢及由β淀粉样蛋白所致神经细胞损伤,对模拟阿尔茨海默氏病(AD)模型小鼠均有保护作用,作用与雌二醇相似。由于其结构与雌激素非常近似,其生物功能也同雌二醇相似,所以植物雌激素α-玉米赤霉醇可能对于绝经后骨质疏松症能产生雌激素样治疗作用。本研究将通过对体外成骨细胞的培养来探讨α-ZAL对成骨细胞增殖、分化以及凋亡等各方面的影响。   1实验材料与方法   1.1 试剂与药物17β雌二醇购自SIGMA公司、α玉米赤霉醇为DR. ehrenstorfer Gmbh 公司产、碱性磷酸酶测定试剂盒购自保定长城临床试剂有限公司,二甲基亚砜(DMSO)为AMRESCO公司产,胰蛋白酶为AMRESCO公司产、Ⅱ型胶原酶购自SIGMA公司。   1.2 动物SD孕鼠(河北医科大学动物中心提供)合格证编号:1004078   1.3 实验方法   1.3.1 大鼠成骨细胞的分离培养   取一日龄SD大鼠十只,断颈椎处死后,放入75%的酒精中,10分钟,酒精中取出小鼠,取下头盖骨; 用PBS洗涤头盖骨两次;于青霉素小瓶内将头盖骨剪成泥状,加入0.25%胰蛋白酶37℃消化20min后,用PBS洗涤,吹打沉淀,吸弃上清液;加入0.1%胶原酶37℃消化1h后,加细胞培养液,吹打均匀;重复一次,于离心机以1000rpm的速度,离心 15min ,使细胞沉淀,加入含10%胎牛血清的DMEM培养液培养, 24 h后换液,以后隔日换液1次。培养至第4-7天,细胞长成致密单层,铺满培养瓶底,进行传代。   1.3.2成骨细胞鉴定:采用钙钴法碱性磷酸酶(ALP)染色进行成骨细胞鉴定。ALP阳性结果为成骨细胞胞浆呈灰黑色。   1.3.3 成骨细胞增殖活性检测(MTT法)将第3代成骨细胞传代接种于96孔板,细胞密度为5×104个/ml,以100μL /孔加入96孔板,细胞贴壁后,除去上清液,每孔分别加入α-ZAL终浓度各为10-5mol/L,10-6 mol/L,10-7 m

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