PPARγ转录阻遏NF―κβ通路抗体外循环肺损伤影响及作用机制.docVIP

PPARγ转录阻遏NF―κβ通路抗体外循环肺损伤影响及作用机制 　　【摘要】目的：探讨过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPARγ）转录阻遏NF-κβ通路抗体外循环肺损伤的影响及其作用机制。方法：建立体外循环肺损伤动物模型并进行分组，对照组大鼠只进行麻醉和CPB 插管，不进行CPB转流；模型组大鼠进行30min 深低温停循环；干预组大鼠经舌下静脉注射0.3mg/kg 过氧化物酶体增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）选择性激动剂罗格列酮（ROSI）30min后，进行30min 深低温停循环，以上每组动物10只。应用Western blotting检测三组动物肺组织PPAR-γ和NF-κβp65蛋白的表达；Elisa法检测三组动物血清D-二聚体和热休克蛋白70（HSP70）水平。结果：与对照组比较，模型组动物PPARγ表达有所增加，但两组比较差异无统计学意义（P0.05），而NF-κβp65表达明显升高（P0.01）；ROSI预处理后，动物PPARγ表达较模型组明显升高，而NF-κβp65表达明显降低（P0.01）。与对照组比较，模型组动物血清D-二聚体水平明显升高，而HSP70明显降低（P0.01）；ROSI预处理后，动物血清D-二聚体水平明显降低，而HSP70明显升高，比较差异均有统计学意义（P0.01）。结论：PPARγ转录通过抑制NF-κβ通路对体外循环肺损伤发挥保护作用。 　　【关键词】过氧化物酶体增殖物激活受体-γ；核转录因子-κβ通路；体外循环；肺损伤 　　【中图分类号】R285.5 【文献标志码】A 【文章编号】1007-8517（2015）23-0022-02 　　体外循环心脏手术为外科常用治疗方法，由于手术过程常合并全身炎症反应和缺血再灌注损伤，往往引起肺功能下降，对术后患者疾病康复产生不利影响[1]。目前，关于体外循环肺保护的研究越来越受到关注，相关机制涉及白细胞反应、补体激活、氧自由基过量产生、细胞因子作用等[2]。 　　过氧化物酶体增殖物激活受体（PPARs）为核激素受体超家族成员。研究表明，PPARγ参与机体多种生理反应调节，尤其对炎性反应发挥了广泛的调节作用，如降低活化氧释放、减少细胞因子以及影响细胞的增殖分化和凋亡[3]。然而，关于PPARY在体外循环（CPB）术后肺损伤过程中如何变化鲜见报道。研究采取常规体循环肺损伤模型，以分析PPARγ在体外循环肺损伤中的作用及其机制，现报道如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 动物模型与分组 动物为成熟雄性昆明种大鼠，体外循环肺损伤大鼠模型由南昌大学心血管病研究所提供，体重250～300g。根据干预方式不同进行动物分组：对照组，大鼠只进行麻醉和CPB 插管，不进行CPB转流；模型组：大鼠进行30min 深低温停循环；干预组：大鼠经舌下静脉注射0.3mg/kg PPAR-γ选择性激动剂罗格列酮（ROSI）30 min后，进行30min 深低温停循环；以上每组动物10只。 　　1.2 组织标本采集 大鼠处死后取右肺固定于4%甲醛溶液中，梯度蔗糖溶液脱水，石蜡包埋，切片，片厚为4μm；组织经脱蜡后，进行苏木精和伊红染色，镜下观察组织结构病理变化；取左肺分放于冻存管中，置于-80℃保存，以备下一步实验测定。 　　1.3 Western blotting检测 取出-80℃保存的左肺组织，提取组织总蛋白，蛋白上样，行SDS电泳分离，硝酸纤维素膜转膜，封闭，再进行一抗、二抗处理，室温脱色摇床避光处理1h，洗膜，荧光系统扫描，应用β-actin 作内参，记录每个条带灰度积分值；采取NIH Image图像软件分析各指标平均吸光度值（average absorbance，AA），对样品积分值/内参照积分值比值进行统计学处理；检测包括PPAR-γ、NF-κβp65表达。 　　1.4 Elisa检测 各组动物于造模后4h 取外周血约5ml，3000r/min 离心10min，储于-80℃ 保存备测，或直接在酶标仪上进行检测，检测指标有D-二聚体和热休克蛋白70（HSP70），试剂盒由北京群晓科苑生物技术有限公司提供。 　　1.5 统计学处理 数据采用SPSS19.0统计学软件进行分析，计量资料应用均数±标准差（x±s）表示，采用t检验，计数资料用χ2检验，P0.05表示差异具有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 PPARγ和NF-κβp65蛋白表达比较 由表1可知，与对照组比较，模型组动物PPARγ表达有所增加，但两组比较差异无统计学意义（P0.05），而NF-κβp65表达明显升高（P0.01）；ROSI预处理后，动物PPARγ表达较模型组明显升高，而NF-κβp65表达明显降低，比较差异均有统计学意义（P0.01）。 　　2.2 D-二聚体和HSP