IFN―γ和IL―1在鼻咽血管纤维瘤中表达及其意义.docVIP

IFN―γ和IL―1在鼻咽血管纤维瘤中表达及其意义 　　[摘要] 目的 检测干扰素-γ（interferon-γ，IFN-γ）和白细胞介素-1（interleukin 1，IL-1）在鼻咽血管纤维瘤中的表达水平，探讨IFN-γ和IL-1在鼻咽血管纤维瘤骨质破坏机制中的作用。 方法 应用免疫组化SP法检测IFN-γ和IL-1在2000～2012年期间20例鼻咽血管纤维瘤和2015年3～6月期间10例正常下鼻甲组织中的表达。 结果IFN-γ和IL-1蛋白在JNA中的阳性表达率均为100%，明显高于IFN-γ和IL-1蛋白在下鼻甲组织中的阳性表达率20%（P均0.05）。 结论 IFN-γ和IL-1在鼻咽血管纤维瘤组织中阳性表达率较高，可能是参与鼻咽血管纤维瘤骨质破坏的相关因素。 　　[关键词] 干扰素-γ；白细胞介素-1；鼻咽血管纤维瘤；免疫组化 　　[中图分类号] R739.63 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2016）18-0001-03 　　鼻咽血管纤维瘤（juvenile nasopharyngeal angiofibroma，JNA）为鼻咽部最常见的良性肿瘤，常发生于10～25 岁的青年男性，由大量的血管、弹性纤维及致密结缔组织组成，Liang等[1]认为其本质是血管错构瘤。虽然JNA是良性肿瘤，但其破坏颅底及周围骨质可导致严重的并发症。JNA破坏颅底骨质进行扩张性生长的机制尚未清楚。最近在研究病理性骨质破坏性疾病中发现IFN-γ和IL-1在胆脂瘤型中耳炎骨质破坏中发挥重要作用[2-4]。JNA的骨质破坏过程与胆脂瘤的骨质破坏过程有许多相似之处，它们都是良性肿瘤，都会破坏颅底骨质进行扩张性生长。本实验拟应用免疫组化染色SP法检测IFN-γ和IL-1在JNA组织中的表达，探讨其在JNA骨质破坏机制中的作用，现报道如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料来源 　　20例鼻咽血管纤维瘤标本来自于2000～2012年福建医科大学附属第一医院病理科，福建省耳鼻喉研究所石蜡包埋存档蜡块。鼻咽血管纤维瘤组：鼻咽血管纤维瘤患者标本共20例，术后病理诊断均为鼻咽血管纤维瘤，患者年龄11～35岁，平均18.5岁，其中男20例，女0例。按Metin等[5]的肿瘤分期标准：Ⅰ期7例，Ⅱ期6例，Ⅲ期6例，Ⅳ期1例。对照组10例下鼻甲组织术后诊断为下鼻甲慢性炎症，患者年龄18～40岁，平均25岁，其中男5例，女5例。标本来自2015年3～6月温州医科大学附属第一医院耳鼻喉-头颈外科，在内窥镜下取鼻中隔偏曲伴下鼻甲肥大患者的下鼻甲组织。标本均是24 h内取材，应用4%甲醛固定，常规石蜡包埋，4 μm厚连续切片。 　　1.2 试剂 　　兔抗人IFN-γ单克隆抗体购自SANTA CRUZ公司和兔抗人IL-1多克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司。 　　1.3 免疫组织化学染色 　　操作严格按照说明书进行，步骤如下：①烤片，68℃，20 min；②常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水；二甲苯Ⅰ20 min-二甲苯Ⅱ20 min-100%酒精Ⅰ10 min-100%酒精Ⅱ10 min-95%酒精5 min-80%酒精5 min-70%酒精5 min；③阻断 灭活内源性过氧化物酶：3%H2O2 37℃孵育10 min，PBS冲洗3×5 min；④抗原修复：置0.01M枸橼酸缓冲液（pH 6.0）中煮沸（95℃，15～20 min），自然冷却20 min 以上，再用冷水冲洗缸子，加快冷却至室温，PBS冲洗3×5 min；⑤正常羊血清工作液封闭，37℃10 min，倾去勿洗；⑥滴加一抗4℃冰箱孵育过夜，PBS冲洗3×5 min（用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照）；滴加生物素标记二抗，37℃孵育30 min，PBS冲洗3×5 min；⑦滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液，37℃孵育30 min，PBS冲洗3×5 min；⑧DAB/H2O2反应染色，自来水充分冲洗后，苏木素复染，常规脱水，透明，干燥，封片。用PBS代替第一抗体作为阴性对照，用已知阳性片做阳性对照。 　　1.4 免疫组化结果判断[6] 　　IFN-γ和IL-1的阳性染色者细胞胞浆有棕黄色颗粒沉着，阳性细胞数：0分为无阳性细胞，1分为阳性细胞数75%。染色强度：0分为无染色，1分为弱染色，2分为中等强度染色，3分为强染色。计算各抗体的阳性细胞数和染色强度得分，以3～7分为阳性。 　　1.5 统计学分析 　　应用SPSS13.0 统计学软件进行分析，IFN-γ和IL-1阳性表达率采用χ2 检验或者精确概率法进行比较，P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 IFN-γ和IL-1的阳性表达 　　主要位于JNA血管壁内皮细胞和基