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HPVE6E7mRNA检测在宫颈疾病中临床应用探讨 　　【摘要】 目的：探讨人乳头瘤病毒（HPV）癌基因E6/E7 mRNA检测在宫颈病变中的临床应用。方法：收集210例宫颈疾病疑似患者的宫颈分泌物标本行液基细胞学（TCT）检测，同时分别进行实时荧光定量PCR HPV DNA检测及支链DNA（bDNA）HPV E6/E7 mRNA检测，对两组检测结果进行对比。结果：HPV E6/E7 mRNA特异性高于HPV DNA。细胞学病变组的HPV E6/E7 mRNA阳性率和拷贝数均比细胞学正常组增高，差异有统计学意义（P0.05）。结论：HPV E6/E7 mRNA检测与HPV DNA检测相比具有较高的特异性，HPV E6/E7 mRNA检测对宫颈癌的筛查具有较好的临床应用前景。 　　【关键词】 宫颈病变； HPV E6/E7 mRNA； bDNA 　　中图分类号 R737.33 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2015）1-0059-02 　　doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2015.01.031 　　宫颈癌是最常见的一种妇科恶性肿瘤，其发生和发展存在着一个比较长的、可逆转的癌前演变过程，所以早期诊断、早期治疗尤为重要。HPV持续性感染是宫颈上皮内瘤变及宫颈癌发生的必要条件[1]。HPV早期基因编码E1、E2、E4、E5、E6、E7蛋白，其中E6、E7蛋白被认为是肿瘤进展和保持癌症状态的基本条件，只有存在HPV E6/E7致癌蛋白时才会发展成宫颈癌[2]。HPV E6/E7 mRNA检测可了解人体细胞内HPV E6/E7致癌基因的转录情况，反映其活性程度。本文采用PCR HPV DNA和bDNA HPV E6/E7 mRNA两种检测方法对宫颈疾病进行筛查，并结合TCT检测结果进行比较分析，探讨HPV E6/E7 mRNA在宫颈疾病筛查中的临床应用。现报告如下。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　以2014年1-7月在笔者所在医院因宫颈炎症、阴道异常流血及排液、阴道分泌物增多而就诊的210例患者为研究对象，均为已婚或有多年性生活史，年龄20～65岁，平均年龄为38岁。 　　1.2 方法 　　1.2.1 标本的采集 将专用的宫颈刷伸入子宫颈外口，轻压并依顺时针方向旋转3～4周，取得宫颈口脱落细胞。迅速将采样刷留在标本储存瓶中，盖好盖子，作好标记立即送检。-20 ℃冰箱保存。检测前取出室温放置30 min。标本一部分用于HPV DNA检测，另一部分用于HPV E6/E7 mRNA检测。 　　1.2.2 HPV DNA检测 采用港龙生物技术（深圳）有限公司生产的试剂盒和美国BIO-RAD公司制造的CFX实时荧光定量PCR仪，操作方法严格按照产品说明书进行。 　　1.2.3 HPV E6/E7 mRNA检测 试剂和仪器均采用河南科蒂亚（新乡）生物技术有限公司生产的试剂盒和冷光仪。操作方法严格按照产品说明书进行。 　　1.2.4 TCT 将标本储存瓶内的标本经自动化系统处理，制成薄层细胞涂片，95%酒精固定，H-E染色，光镜检查。TCT细胞学分类法：未见上皮内病变/恶性细胞（NILM）、不典型鳞状上皮（ASC）、轻度鳞状上皮内病变（LSIL）和重度鳞状上皮内病变（HSIL）。 　　1.3 统计学处理 　　采用SPSS 17.0软件对所得数据进行统计分析，不同细胞学诊断级别间HPV癌基因E6/E7 mRNA水平比较采用均数±标准差（x±s）表示，比较采用t检验；不同方法的阳性率比较以率（%）表示，比较采用字2检验。P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 HPV DNA和HPV E6/E7 mRNA检测符合情况 　　210例患者标本HPV DNA总体阳性率为55.23%，HPV E6/E7 mRNA阳性率为38.09%。经字2检验，HPV DNA检测技术阳性率明显高于HPV E6/E7 mRNA，差异有统计学意义（字2=30.85，P0.001）。 　　HPV E6/E7 mRNA的灵敏性和特异性分别为52.8%（56/106）、76.9%（80/104），HPV DNA的敏感性和特异性分别为73.6%（78/106）、63.5%（66/104）。HPV E6/E7 mRNA的诊断敏感性低于HPV DNA，但特异性高于HPV DNA。详见表1。 　　2.2 同细胞学诊断级别间HPV DNA与HPV E6/E7 mRNA的阳性率比较 　　细胞学病变组的HPV E6/E7 mRNA和HPV DNA的阳性率均比细胞学正常组增高，差异有统计学意义（其中HPV E6/E7 mRNA：字2=19.71，P0.05），详见表2。 　　2.3 受检标本HP