LC―MSMS法测定大鼠血浆中阿霉素药物浓度及应用.docVIP

LC―MSMS法测定大鼠血浆中阿霉素药物浓度及应用 　　[摘要] 目的 建立液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）法测定大鼠血浆中阿霉素的血药浓度，并用于阿霉素载药纳米粒的体内药动学研究。 方法 色谱柱采用Shim-pack XR-ODS柱（2.0 mm×100 mm，2.2 μm），仪器采用API 4000三重四极杆串联质谱仪，采用多反应监测（multiple reaction monitoring，MRM）定量离子对为m/z544.2→m/z396.9（阿霉素）和m/z357.3→m/z133.8（吡格列酮，内标）；甲醇沉淀蛋白法处理样品。 结果 阿霉素在2.0～2000 μg/L范围内线性关系良好，定量下限为2.0 μg/L，血浆中的内源性物质不干扰阿霉素的测定；日内和日间精密度RSD均小于±15.0%；阿霉素低、中、高3个QC浓度的提取回收率分别为（92.1±5.9）%、（82.8±2.9）%和（80.1±9.7）%，基质效应分别为（91.1±2.4）%、（82.1±1.7）%和（81.2±2.5）%。 结论 该方法适用于阿霉素纳米粒在大鼠体内的药物动力学研究。 　　[关键词] 液相色谱-串联质谱；阿霉素；药动学研究；含量测定 　　[中图分类号] R969.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2014）12（b）-0055-05 　　阿霉素主要通过嵌入DNA而抑制核酸的合成，产生细胞毒性作用，属周期非特异性药物，对各种生长周期的肿瘤细胞都有杀灭作用[1]。由于心脏毒性较大，在实体瘤内部渗透性差，临床应用受到极大的限制[2-3]。由于纳米给药系统具有靶向性、缓释性、降低药物毒性和提高药物稳定性等特点，阿霉素的纳米靶向传递是当前研究的热点[4-5]。由于纳米制剂给药量小，需要建立灵敏、高效的体内药物浓度测定方法进行药动学研究。目前，阿霉素的体内测定方法主要有HPLC-UV[6]、荧光光度法[7-8]、HPLC-FLU[9-12]和液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）[13-15]等方法，以荧光检测方法为主，液相-质谱联用法报道较少。其中HPLC-UV、荧光光度法和HPLC-FLU检测灵敏度低，LC-MS/MS多采用液液萃取的提取方法，样品处理较复杂，且血浆用量大，分析时间较长，且用于阿霉素纳米制剂药动学研究的较少。本文旨在建立一种简便快速、专属性强的LC-MS/MS法测定大鼠血浆中阿霉素的血药浓度，并将其应用于阿霉素载药纳米粒的药物动力学研究。 　　1 仪器与试药 　　1.1 仪器 　　API 4000串联四极杆质谱仪（美国Applied Bio-systems公司），LC-30A高效液相色谱仪（日本Shimadzu公司），Eppendorf AG5804R低温高速离心机（德国Eppendorf公司），XW-80A涡旋混合器（姜堰市康健医疗器具有限公司），梅特勒AE240电子天平（Mettler托利多仪器上海有限公司），Milli-Q ADVANTAGEA10纯水仪（Merck Millipore公司），DW-86L628医用低温箱（青岛海尔特种电器有限公司）。 　　1.2 试药 　　盐酸阿霉素（纯度98.89%，上海宝曼生物科技有限公司，批，盐酸吡格列酮（含量质量分数99.55%，济南中科一通化工有限公司，批号2011 0904），阿霉素载药纳米粒 （含量0.6 g/L，宁夏医科大学总医院临床药理研究室制备）。色谱甲醇、乙腈（美国Fisher公司）。 　　1.3 动物 　　6只SD大鼠，雄性，平均体重约为230 g，由宁夏医科大学实验动物中心提供，实验动物使用许可证号SCXK（宁）2011-0001。 　　2 方法与结果 　　2.1 溶液配制及样品处理 　　2.1.1 溶液配制 精密称取盐酸阿霉素10.7 mg，置于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解后并定容，配制相当于阿霉素浓度为1.00 g/L的溶液。用甲醇水（1∶1）稀释浓度为2、4、10、20、100、400、1000、2000 μg/L系列标准溶液，以及浓度分别为5、80、1600 μg/L的质量控制（QC）溶液，置于-4℃冰箱备用。 　　精密称取盐酸吡格列酮11.0 mg，置于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解后并定容，配制相当于吡格列酮浓度为1.00 g/L的溶液。取上述储备液用甲醇水（1∶1）稀释至浓度为15 μg/L的内标溶液，置于-4℃冰箱备用。 　　2.1.2 血浆样品处理 取大鼠血浆50 μL，置于1.5 mL EP管中，加入50 μL 15 μg/L吡格列酮溶液，50 μL甲醇水（1∶1），涡旋30 s，加入250 μL甲醇，涡旋2 min，4℃离心10 min（14 000