NF―κBp65基因沉默对类风湿性关节炎滑膜细胞增殖凋亡影响.docVIP

NF―κBp65基因沉默对类风湿性关节炎滑膜细胞增殖凋亡影响 　　[摘要] 目的 探讨NF-κB p65基因沉默对类风湿性关节炎滑膜HFLS-RA细胞增殖及凋亡的影响。 方法 采用阳离子脂质体LipofectamineTM2000转染NF-κB p65的siRNA至HFLS-RA细胞中，利用RT-PCR和Western blot技术分别检测HFLS-RA细胞中NF-κB p65 mRNA和蛋白的表达情况。噻唑蓝MTT法和流式细胞仪检测细胞的增殖率和凋亡率。 结果 与空白对照组和阴性对照组比较，转染siRNA后的HFLS-RA细胞中NF-κB p65 mRNA、蛋白表达量和细胞增殖率均明显下降，而细胞凋亡率明显升高，差异均有统计学意义（均P 0.05）。 结论 NF-κB p65基因在类风湿性关节炎滑膜HFLS-RA细胞的增殖和凋亡过程中起着重要作用，使其沉默后能够抑制滑膜HFLS-RA细胞增殖，诱导其凋亡。 　　[关键词] 类风湿性关节炎；滑膜细胞；NF-κB；细胞增殖；细胞凋亡 　　[中图分类号] R593.220.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）12（b）-0008-04 　　[Abstract] Objective To investigate the effect of NF-κB p65 gene silencing on proliferation and apoptosis of rheumatoid arthritis synovial HFLS-RA cells. Methods NF-κB p65 siRNA was transfected into HFLS-RA cells by cationic liposome LipofectamineTM2000， and the expression of NF-κB p65 mRNA and protein in HFLS-RA cells was detected by RT-PCR and Western blot respectively. The proliferation and apoptosis of HFLS-RA cells were separately detected by MTT and flow cytometry assay. Results Compared with the blank control group and the negative control group， the expression of NF-κB p65 mRNA， protein and cell proliferation rate in the HFLS-RA cells transfected with siRNA was decreased， while the apoptosis rate was increased， and the differences were statistically significant （all P 0.05）. Conclusion NF-κB p65 gene plays an important role in the proliferation and apoptosis of synovial HFLS-RA cells in rheumatoid arthritis， and silencing its expression can inhibit the proliferation of synovial HFLS-RA cells and induce its apoptosis. 　　[Key words] Rheumatoid arthritis； Synovial cells； NF-κB； Cell proliferation； Cell apoptosis 　　?风湿性关节炎（RA）是一种病因未明的复杂的自身免疫疾病。滑膜成纤维样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocytes，FLSs）过度增生是RA最显著的特征之一，在RA的发生发展过程中起着重要作用[1-2]。因此，寻找抑制滑膜细胞增殖或促进凋亡的作用靶点，可有效缓解或治疗RA病。NF-κB是一种广泛的真核细胞核转录因子，调控着多种基因的表达，与机体的多种生理病理疾病密切相关[3-4]。研究发现，NF-κB在RA滑膜炎性反应中起着重要作用[5-6]，但其具体的作用机制研究较少。本研究采用阳离子脂质体转染NF-κB p65的siRNA，观察NF-κB p65基因沉默对滑膜细胞HFLS-RA增殖及凋亡的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与仪器