VEGF基因多态性在多囊卵巢综合征中表达及意义.docVIP

VEGF基因多态性在多囊卵巢综合征中表达及意义 　　[摘要] 目的 探讨血管内皮生长因子（VEGF）的1154G/A位点单核苷酸多态性（SNPs）与多囊卵巢综合征（Polycystic ovarian syndrome，PCOS）的相关性。 方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态方法检测110例多囊卵巢综合征患者（研究组）及100例正常妇女（对照组）的VEDG基因-1154G/A多态性位点的基因频率分布情况。结果 在110例PCOS患者及100例对照组中，VEGF-1154G/A的SNP的AA、GA、GG3种基因频率在PCOS组和对照组中分别为2.6%、26.4%、71.0%和5.0%、30.0%、65.0%。G、A等位基因频率分布在PCOS组和对照组分别是82.3%、17.7%和78.0%、22.0%。两组比较差异有统计学意义（P0.05）。结论 VEGF-1154G/A位点的单核苷酸多态与PCOS的发生、发展相关。 　　[关键词] 多囊卵巢综合征；血管内皮生长因子（VEGF）；单核苷酸多态 　　[中图分类号] R713 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2014）05（b）-0094-02 　　多囊卵巢综合征（Polycystic ovarian syndrome，PCOS）是育龄妇女中常见的内分泌代谢紊乱疾病 [1]。近年来研究表明，血管内皮生长因子（VEGF）是目前发现的活性和特异性最强的血管生成因子[2]。在目前，血管内皮生长因子（VEGF）被认为可能参与了多囊卵巢综合征的发生、发展[5]。为对VEGF与PCOS的发生、发展风险相关性进行研究，选取2008年1月-2010年12月生育年龄妇女110例为研究对象，现报道如下。 　　1 对象与方法 　　1.1 研究对象 　　在沈阳市第四人民医院就诊，符合PCOS诊断标准的生育年龄妇女110例。110例生育年龄妇女均为就诊于沈阳市第四人民医院妇科门诊的患者，女性，年龄18～38岁，平均（25.67±4.18）岁。符合PCOS的诊断标准。PCOS的诊断标准参照美国生殖医学学会（ASRM）鹿特丹修正的诊断标准。按此标准至少符合其中2项：①稀发排卵或无排卵；②临床和（或）生化有高雄激素表现；③超声检查发现卵巢多囊性变。选择同期月经正常的育龄期妇女100例，年龄20～38岁，平均（24.55±4.65）岁作为对照组。两组患者3个月内均无激素治疗史，无内外科及其他疾病史。 　　1.2 研究方法 　　1.2.1 DNA提取 抽取门诊就诊的PCOS患者及因其他妇科疾病如功血，流产，盆腔炎症等排除PCOS患者的外周静脉血5 mL，以枸橼酸钠抗凝，采用蛋白酶K-氯化钠盐析法提取白细胞DNA。 　　1.2.2 基因多态性监测 VEGF-1154G/A基因型检测均采用PCR-限制性片段长度多态性（PCR-RELP）方法。PCR反应体系：PCR反应体积20 μL，其中模板DNA100 ng，PCR缓冲液1.6 μL×10倍。耐热DNA聚合酶1 U，10 mmol/L dNTPs 0.4 μL。5 μmol/l 上、下游引物（上海生物技术有限公司）各1 μL.上游：5′-TCCTGCTCCCTCCTCGCCAATG-3′（F）；下游：5′-GGCGGGGACAGGCGAGCATC-3′（R）。退火温度为60 ℃。产物长度为206C，内切酶：mnlI bp。酶切片段长度为：上游：185（188）+22（20）（A）；下游：151（154）+36+24（20）（G）。酶切产物于4%的琼脂糖凝胶电泳分析基因型。通电，稳压100 V。电泳时间分别为30 min。 　　1..3 统计方法 　　采用SPSS11.5统计学分析软件中t检验和χ2检验分别对计量资料和计数资料进行数据分析。以非条件Logistic回归方法计算表示相对风险度的比值比（OR）及其95%可信区间（CI）。 　　2 结果 　　两组患者 VEGF-1154G/A的SNP的AA、GA、GG3种基因频率及等位基因比较，见表1。 　　表1 VEGF-1154G/A SNPs的基因型和等位基因比较 [n/（%）] 　　基因型/等位基因型 对照组（%）n=100 PCOS组（%）n=110 P值 　　VEGF-1154G/A基因型 　　GG 65（65.0） 78（71.0） 　　GA 30（30.0） 29（26.4） 0.006 　　AA 5（5.0） 3（2.6） 　　等位基因型 　　G 78（78.0） 91（82.3） 　　A 22（22.0） 19（17.7） 0.001 　　3 讨论 　　多囊卵巢综合征近年有明显升高趋势，但其发病机制至今尚未完全阐明。有关VEGF在