LOX―1受体启动子基因调控及其抗大鼠肾脏损害作用.docVIP

LOX―1受体启动子基因调控及其抗大鼠肾脏损害作用 　　【摘要】 目的：研究吡咯-咪唑聚酰胺（PIP）对凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）受体启动子基因的调控，并探讨其对抗大鼠肾脏损害的作用。方法：雄性SD大鼠50只，按随机数字法将大鼠分为五组，每组10只。A组：普通饲料，未用PIP。B组：高脂饲料（含3%胆固醇+10%猪油），未用PIP。C组：高脂饲料，PIP干预组，C1组按10 ?g/（kg?d）静脉注射；C2组按5 ?g/（kg?d）静脉注射。D组：高脂饲料，他汀干预组，瑞舒伐他汀5 mg/（kg?d）灌胃给药。治疗时间均为8周。检测肾组织LOX-1 mRNA、MMP-9 mRNA表达水平，测定血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量，测定24 h尿蛋白定量、血尿素氮（BUN）和肌酐（Scr）水平。结果：C1组、C2组大鼠肾组织LOX-1 mRNA、MMP-9 mRNA表达水平均较B组低，差异均有统计学意义（P0.05）；C1组、C2组大鼠24 h尿蛋白定量较B组明显降低（P0.05）。结论：PIP化合物能明显下调高脂血症大鼠肾组织LOX-1 mRNA表达，改善肾功能及抑制肾脏损害。 　　【关键词】 凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1； 吡咯-咪唑聚酰胺； 肾脏损害 　　脂质代谢紊乱是慢性肾脏病进展的独立危险因素。脂质异常可使肾组织内生物代谢紊乱、血流动力学及流变学改变，导致并加重蛋白尿和肾脏病理变化[1]。研究报道，氧化型低密度脂蛋白（OX-LDL）在肾脏病的发病机制中起关键性作用。凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）是OX-LDL的膜受体，分布于肾小球内皮细胞、肾小球系膜细胞及肾组织间隙细胞等，并在高胆固醇血症时表达显著上调[2]。LOX-1通过与OX-LDL特异性结合介导肾脏损伤的病理过程，包括诱导黏附因子和炎症因子表达、加剧局部炎症等作用。针对LOX-1的吡咯-咪唑聚酰胺（PIP）是一种人工合成的小分子化合物，能特异性结合于LOX-1受体启动子基因，有效抑制LOX-1基因表达[3]。本实验观察针对LOX-1的PIP对高脂血症大鼠肾组织LOX-1基因表达的影响及其抗肾脏损害的作用。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物及分组 健康雄性SD大鼠50只，体重160～200 g。以数字法将大鼠随机分为五组，每组10只。五组大鼠在体重及其他方面比较，差异无统计学意义（P0.01），具有可比性。A组：普通饲料，未用PIP。B组：高脂饲料（含3%胆固醇+10%猪油），未用PIP。C组：高脂饲料，PIP干预组，C1组按10 ?g/（kg?d）静脉注射；C2组按5 ?g/（kg?d）静脉注射。D组：高脂饲料，他汀干预组，瑞舒伐他汀5 mg/（kg?d）灌胃给药。治疗时间均为8周。 　　1.2 检测方法 　　1.2.1 标本留取 实验期间，每两周采用套尾法测量血压，以及代谢笼采集24 h尿液各一次。血浆和肾脏标本在苯巴比妥麻醉状态下采集，其中肾组织首先行生理盐水灌注冲洗，然后切片放入10%福尔马林（pH 7.4）固定，石蜡包埋，用于组织学检查。剩余肾组织放入液氮冷冻或-80 ℃深低温冰箱保存。 　　1.2.2 Real-time PCR 提取总RNA，合成cDNA文库，通过Real-time PCR检测肾皮质LOX-1 mRNA表达水平，以及基质金属蛋白酶-9（MMP-9）mRNA表达水平。 　　1.2.3 血液生化学及尿液检测 试验结束前，取血测定总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平。测定24 h尿蛋白定量、血尿素氮（BUN）和肌酐（Scr）水平。测定血浆钠离子（Na+）、钾离子（K+）和醛固酮水平。 　　1.2.4 组织PIP含量分析 取肝、肾、肺、心脏及脂肪组织，制成匀浆，化学方法粗提PIP，高效液相色谱分析PIP。 　　1.3 统计学处理 采用SPSS 20.0统计学软件分析数据，计量资料以（x±s）表示，比较采用F检验，计数资料比较采用 字2检验，以P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 PIP对大鼠肾组织LOX-1 mRNA、MMP-9 mRNA表达水平的影响 B组大鼠肾组织LOX-1 mRNA、MMP-9 mRNA水平均较A组明显升高，差异均有统计学意义（P0.01）。C1组、C2组及D组大鼠肾组织LOX-1 mRNA、MMP-9 mRNA水平较B组低，差异均有统计学意义（P0.01）。见表1。 　　2.2 PIP对大鼠血脂水平的影响 B组大鼠血清TC、TG、LDL-C含量均较A组明显升高，差异均有统计学