db―cAMP和卵丘细胞单层对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育潜力研究.docVIP

db―cAMP和卵丘细胞单层对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育潜力研究 　　摘要：为提高卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的能力，探讨了双丁酰基腺苷酸环化酶（db-cAMP）和卵丘细胞单层共培养对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎体外发育潜力。结果表明，成熟培养液中分别添加0、0.5、1.0、1.5和2.0 mmol/L的db-cAMP时，卵母细胞的体外成熟率依次降低，但浓度为1 mmol/L时的孤雌胚囊胚率（27.03%）显著高于其他各组（P0.05）；卵丘细胞单层共培养卵母细胞时，其成熟率、卵裂率及囊胚率（86.00%、89.04%、28.36%）也得到了显著提高；0.4 mmol/L的db-cAMP和卵丘细胞单层共培养时，其成熟率和卵裂率（85.78%和88.95%）与对照组差异不显著，但囊胚率（35.14%）显著提高。0.4 mmol/L的db-cAMP和卵丘细胞单层共培养能够显著提高猪卵母细胞的体外成熟及孤雌胚胎的发育潜力。 　　关键词：db-cAMP；卵丘细胞单层；体外发育；猪 　　中图分类号：S828 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）24-6303-04 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.24.053 　　Abstract： To improve the developmental potential of pig oocytes in vitro maturation and parthenogenetic embryos， the effects of db-cAMP concentration and cumulus cells monolayer on in vitro maturation and parthenogenetic potential of pig oocytes was investigated. The tests indicated that as the concentration of db-cAMP increased （0、0.5、1.0、1.5 and 2.0 mmol/L）， the maturation rate of oocytes reduced successively. But the blastocyst rate of 1 mmol/L group（27.03%） was significant higher than others（P0.05）； When oocytes were co-cultured with pig cumulus cell monolayer， the maturation rate、cleavage rate and blastocyst rate（86.00%、 89.04%、 28.36%） were significantly improved. 0.4 mmol/L db-cAMP co-cultured with the monolayer cumulus cell had no significant difference in maturation rate and cleavage rate（85.78% and 88.95%）， but the blastocyst rate（35.14%） were significantly improved. 0.4 mmol/L db-cAMP co-cultured with monolayer cumulus cell can improve the development of parthenogenetic embryos. 　　Key words：db-cAMP；cumulus cell monolayer；in vitro development；pig 　　随着胚胎生物技术的发展，猪卵母细胞体外成熟及发育能力已成为体外受精（IVF）、胞浆单精子注射（ICSI）和核移植（NT）等技术成功的关键[1]。然而，目前猪卵母细胞体外成熟系统并不完善，体外成熟培养时间较长，许多理化因素直接或间接地影响着卵母细胞的体外成熟及后期发育。研究表明，猪的卵母细胞核在38 h就完成了核的成熟，而胞质的成熟则要到42 h左右才能完成，核质成熟的不同步可能是影响猪卵母细胞体外发育的主要因素[2]。部分卵母细胞在体外培养过程中能自发恢复减数分裂从而使细胞核成熟，但是细胞质的成熟往往要滞后于核的成熟而导致卵母细胞成熟质量差，最终影响后期胚胎的发育[3]。因此，提高卵母细胞的体外成熟质量，使其卵母细胞核、质同步成熟，获得较强的发育能力，是提高体外胚胎生产效率的一个重要环节[4，5]。 　　腺苷酸环化酶（cAM