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不同培养条件对幸香草莓离体叶片再生的影响 　　摘　要：以草莓品种幸香叶片为外植体，研究了叶龄、暗培养、不同颜色的滤光膜、AgNO3、不同激素配比等对叶片再生不定芽的影响，建立了高效再生体系。结果表明，5周的叶龄、暗培养5～6周、附加AgNO31.0～40mg/L利于不定芽的分化；不同颜色滤光膜对草莓分化不定芽的效应不同，红膜、黄膜、绿膜能显著提高再生频率，红膜处理能滤去紫外光、蓝紫光、绿光，再生频率达最大，蓝膜对再生频率无影响，紫膜对再生频率起显著抑制作用；MS+TDZ4.0mg/L+NAA0.1mg/L暗培养6周最适于不定芽分化，再生频率达98.9％，平均再生不定芽3.8个。 　　关键词：草莓：叶片；不定芽；再生；光质 　　中图分类号：S668.4　文献标识码：A　文章编号：1009－9980(2007)01－105－04 　　 　　草莓叶片离体再生技术是进行草莓遗传转化和化学诱变突变体离体筛选的基础技术，高效、稳定的再生系统是此类工作的前提。草莓叶片离体再生已有很多文献报道。研究内容涉及影响再生的各种相关因子，其中试材的基因型是决定再生频率高低的重要因子之一。草莓品种幸香是由丰香与爱莓杂交育成的，品质优良，在我国栽培面积逐步扩大，但抗病性差，特别是不抗白粉病。有报道显示丰香品种再生能力弱，但通过培养条件的改进已建立了高效再生体系，作为其后代的幸香品种再生能力如何尚未见报道。本文研究了叶龄、暗培养、光质、AZNO3，、不同激素组合等影响幸香草莓叶片离体再生的因素，建立了再生体系，为进行遗传转化和诱变育种突变体离体筛选提供技术依据。 　　 　　1 材料和方法 　　 　　1．1 材料 　　供试材料为幸香草莓试管苗，由本实验室保存，试管苗的继代培养基为MS+BA 0.5mg/L+IBA0.1mg/L。 　　 　　1．2　方法 　　实验时选取生长一致的植株，剪取部位、大小一致的叶片，去叶缘和叶尖，切成0.2cm×0.2cm的叶块，近轴面向下与培养基接触进行培养。每处理接种10～15个外植体，重复8次，2周重新继代1次。叶片再生以MS为基本培养基，蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH5.8，光照2000lx，16h/d，温度(24±1)℃。 　　研究叶龄、暗处理、滤光膜、AgNO3对叶片再生的影响，培养基为MS+TDZ4.0mg/L+IAA 0.1mg/L。滤光膜处理时将接种叶盘的培养皿覆盖于不同颜色(红、绿、蓝、黄、紫)的滤光膜中，置于光下培养，以荧光灯下培养为对照。用法国Secomam公司的Anthelie advanced 2型紫外/可见分光光度计扫描测定200～900nm滤光膜的透光率。各处理在培养70d后调查外植体不定芽再生频率和再生芽数。 　　 　　2　结果与分析 　　 　　2．1 叶龄对叶片再生不定芽的影响 　　表1结果表明，叶龄35d以内的叶片再生能力随叶龄的增大而提高，但14d以内的幼嫩叶片不利于叶片再生，因此幸香草莓叶片再生选择5周龄的叶片较为合适。5周龄以上的叶片本实验未做处理，再生能力如何需重新实验验证，前人报道叶龄超过一定值后再生能力有所降低。 　　　 　　2．2 暗处理对叶片再生不定芽的影响 　　暗处理能显著提高幸香草莓叶片的再生率，促进了不定芽的分化(表2)。当一直进行光培养时，再生频率仅为16.3％，随暗处理时间的延长再生频率呈现逐渐增长的趋势，当暗处理时间为6周时再生频率达到最大值(81.3％)，延长至7周时再生能力有所下降。 　　 　　2．3 不同颜色的滤光膜对叶片再生不定芽的影响 　　　 　　测定了不同颜色滤光膜在200～900nm的透光值(图1)。在紫外光波段(300～400nm)，红膜透光值最低，峰值仅为2.3％，其次是黄膜，透光值峰值为11.9％，绿膜、蓝膜、紫膜透光值峰值分别为43.1％、59.4％、56.4％。在可见光波段(400～780nm)，红膜透光值在610nm开始上升，670nm达到峰值，说明红膜能滤去紫外光、蓝紫光(400～510nm)、绿光(510～610nm)，而红橙光及远红光(610～900nm)则能较多地透过。黄膜在450～580nm透光值逐渐上升并维持在较高水平。绿膜在580nm处有另一峰值而不同于其他色膜。蓝膜和紫膜的透光值变化趋势相似，对紫外光和蓝紫光都有较大的透光值。 　　　 　　试验中使用的滤光膜处理中，红膜、黄膜、绿膜对叶片不定芽的分化起促进作用(表3)，以红膜效果最好，再生频率极显著高于对照，蓝膜处理的再生频率接近于对照，而紫膜处理的再生频率为0。各膜色处理对再生能力的影响与紫外光波段的透光值呈负相关，说明紫外光对叶片不定芽的分化起抑制作用。 　　　　 　　2．4 AgNO3对叶片再生不定芽的影响