不同梯度NaCl胁迫对甜高粱幼苗抗氧化同工酶亚基及酶活性影响.docVIP

不同梯度NaCl胁迫对甜高粱幼苗抗氧化同工酶亚基及酶活性的影响 　　摘要： 以甜高粱品种M-81E为材料，采用水培的方法，研究盐浓度为0、25、50、100mmol/L的胁迫处理对甜高粱幼苗抗氧化酶[超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）、抗坏血酸过氧化物酶（APX）]同工酶亚基、酶活性以及叶片中丙二醛含量的影响。结果表明：不同浓度的盐胁迫对甜高粱幼苗叶片中SOD、POD、CAT、APX活性的影响程度不同，SOD活性随着盐胁迫时间的延长和浓度的增大在一定范围内降低，而POD、CAT、APX活性却在一定范围内显著升高，表现为同工酶亚基条带增多或者亮度增强。甜高粱幼苗叶片丙二醛含量随着胁迫时间的延长有上升趋势，但不显著。由研究结果可知，盐胁迫对甜高粱的抗氧化酶系统进行了修饰，导致SOD活性下降，因此SOD并没有起到清除过氧化物的作用，而CAT、APX和POD在甜高粱耐受盐碱胁迫中起到重要的保护作用。 　　关键词： 甜高粱；盐胁迫；同工酶；抗氧化酶系?y；丙二醛 　　中图分类号： Q554；S514.01 文献标志码： A 　　文章编号：1002-1302（2017）22-0089-05 　　宁夏地处西北内陆，有大面积待开发的盐碱化土地，仅银川北部的盐碱化土地面积已经达到总耕地面积的49%，这已经成为宁夏农业生产的重要影响因素之一[1]。因此，筛选适合盐碱地种植的作物，充分开发利用盐碱地，对于当地的经济发展和农业生产有着重要的意义。甜高粱别称糖高粱、芦粟、甜秆等，是禾本科高粱属一年生草本植物，为普通粒用高粱的变种，具有抗旱、耐涝、耐盐碱、适应性强、生物产量高、糖分含量高等特点，对土壤的适应能力很强，是名副其实的高效能植物[2-3]。再吐尼古丽?库尔班等对甜高粱改良盐碱地的效果进行研究，结果表明，种植甜高粱后对盐碱地有非常明显的脱盐效果，种植过程中土壤盐分含量逐渐降低，土壤养分含量也发生明显的变化，其中pH值轻度降低[4]。随着我国出台的《中国可再生能源中长期发展规划》的推行，大力发展盐碱地甜高粱等非粮生物质能源作物的种植，对盐碱化土地的有效利用以及能源危机的缓解有重大意义。 　　当遭受盐碱胁迫时，植物体内会累积较多的活性氧，若不能及时清除就会使膜系统受到损伤，对植物体造成不同程度的伤害甚至死亡。龚明等对盐胁迫下大麦、小麦等叶片脂质过氧化伤害与超微结构的变化研究发现，盐分可以增加膜的透性，增强脂质过氧化作用，最终导致膜系统破坏[5]。盐生植物或耐盐植物在盐碱胁迫下膜系统的变化过程是先被破坏，然后被修复。植物能否维持其膜系统的完整性，关键在于其修复能力大小，而膜系统的修复与 超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、过氧化物酶（POD）、抗坏血酸过氧化物酶（APX）的活性高低是分不开的。SOD、POD、CAT及APX是植物体内的抗氧化酶系统，它们相互协调、共同作用来清除膜脂过氧化作用产生的活性氧和丙二醛，最终达到保护膜结构的作用[6]，抗氧化系统的协调作用使活性氧簇（ROS）在体内维持较低水平，从而使植物能进行正常生长和发育。 　　因此，本试验以甜高粱品种M-81E为材料，研究不同浓度的盐胁迫对抗氧化酶SOD、POD、CAT、APX活性以及同工酶亚基、丙二醛（MDA）含量等生理指标的影响，以探讨甜高粱苗期耐盐的生理机制，对甜高粱的适地种植有重要的指导意义，也为开发利用盐碱地发展生物质能源提供品种资源和理论依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　供试甜高粱品种为M-81E，由北方民族大学植物生理实验室提供，选取当年产的籽粒饱满、大小均匀的种子备用。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 幼苗培养及处理 种子用自来水反复冲洗后用10%次氯酸钠消毒10 min，常温下用灭菌水冲洗并浸泡8 h，摆放在铺有2层滤纸的培养皿中，置于27 ℃恒温生化培养箱内催芽。等芽长约为3.0 cm时，置于28 ℃光照培养箱内进行光照培养。待苗高约为5cm时，转至自然光条件下用Hoagland营养液培养，每周更换1次培养液。 　　待甜高粱幼苗长到3叶1心时，将幼苗随机分组，设置0、25、50、100 mmol/L 4个NaCl处理梯度，每个处理设3个重复，于处理后的第2天取叶片提取可溶性总蛋白，用于同工酶电泳检测，于处理后第3、6、12、18天称取成熟叶片0.5 g，用于测定SOD、POD、CAT、APX活性以及丙二醛含量（鲜质量）。 　　1.2.2 酶液的提取及同工酶电泳 取处理第2天的0.5 g新鲜成熟叶片，加入5 mL冰上预冷的50 mmol/L磷酸缓冲液（pH值7.0），于冰浴中研磨，4 ℃、12 000 g离心20 min，收集上清液，即为酶粗提液。可溶性总蛋白含量的测定采用