不同批量诱导方法对家蝇幼虫生长发育影响实验与分析.docVIP

不同批量诱导方法对家蝇幼虫生长发育影响的实验与分析 　　摘要：通过冷刺激、热刺激、冷热刺激、超声刺激及紫外照射刺激等批量诱导方法对家蝇幼虫存活率、生长期、化蛹及羽化等发育影响的比较实验，发现冷刺激、热刺激对家蝇幼虫的生长发育影响较大，冷热刺激、超声刺激和紫外照射刺激对幼虫的生长发育影响相对较小。 　　关键词：家蝇幼虫；批量诱导 　　中图分类号：Q959.226文献标识码：A 　　前言 　　昆虫经诱导后，体内能迅速产生或增加许多体液免疫因子，如凝集素、溶菌酶、抗菌肽等，其中抗菌肽是昆虫体液免疫中重要的抗菌因子。昆虫抗菌肽具有相对分子质量低、热稳定和广谱高效抗菌活性，而且不同于现有的抗生素的抗菌机理，已经成为昆虫学、生理学及药理学等生命科学研究的热点[1]。研究发现，不同的诱导源，如生物的、化学的、物理的因子均可诱导昆虫产生抗菌肽[2]。家蝇表现出极强的适应恶劣环境的能力，对其免疫防御体系的研究具有理论意义和应用价值[3]。随着蝇蛆养殖业的发展，规模和开发层次逐渐扩大和加深，批量化诱导家蝇幼虫富集抗菌肽等生物活性物质的方法和技术逐渐受到研究人员的重视。而鉴于对后续生产安全性、可操作性的考虑，物理诱导方法更具研究价值。前期研究中，课题组明确了家蝇生长发育各阶段抗菌肽基因表达的情况[4]。在此基础上，本研究对可批量化诱导家蝇幼虫的常用的物理方法，如冷刺激、热刺激、冷热刺激、超声刺激、紫外照射刺激等方法，对家蝇幼虫生长发育的影响进行了比较和分析，为进一步推动蝇蛆的科学养殖提供一定的实验依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　1.1.1 种蝇 由广东省疾病预防与控制中心提供。 　　1.1.2 蝇笼 采用50cm×50cm×80cm规格的不锈钢三角框架制成，底部为不锈钢薄板，内部可自由取出的不锈钢条固定尼龙纱网，其中一端辅以长30cm纱布做成的长筒袖套，便于进行换水换食。 　　1.1.3 集卵器 采用100ml塑料烧杯，内放约1/3的诱集产卵的物质，即用万分之一碳酸氨水与果汁混合拌麦麸、奶粉、EM菌液，半干捏之成团触之即散，以便于成蝇钻入产卵。 　　1.1.4 幼虫饲养盒 采用25cm×25cm×50cm塑料箱，上盖纱网。 　　1.1.5 饲料 成蝇饲料为粉末状葡萄糖；幼虫饲料按照如下配方配制：麦麸：1000g，奶粉：50g，EM菌液：50ml1000倍稀释后液体，用适量的水混匀，调节PH值至6.5～7.0。 　　1.2 饲养管理 　　每个蝇笼内成蝇以800～1000头，每天保持光照时间12h、温度26～28℃、湿度70%～80%。成蝇羽化后3d在笼中放入集卵器，每天在12：00和18：00各收集1次。幼虫孵化后根据生长情况、幼虫密度以及饲料消耗情况，及时更换新鲜饲料。收集幼虫时先在上方光照照射15min，使幼虫钻爬到饲料的下方，将上方大部分消化过的饲料去除，然后将幼虫及剩余的少部分饲料一起放入托盘中在风扇下吹30min，可将剩余的饲料全部吹净。 　　1.3 幼虫的批量诱导 　　冷刺激：将3龄幼虫置于冰上放置15min，室温下放置30min，重复3次；热刺激：将3龄幼虫置于恒温水浴锅中45℃水浴10min，室温放置30min，重复3次；冷热刺激：将3龄幼虫先在冰上放置5min，在45℃水浴3min，重复3次；超声刺激：将3龄幼虫收集后，放入烧杯中，加入适量蒸馏水，以没过虫体为佳，在超声清洗仪中以功率50W、50Hz处理1min；紫外照射刺激：将3龄幼虫与饲料分离，紫外灯下照射30min。每个处理组幼虫数量为30只，并设3个平行处理组，诱导处理后正常饲养，观察幼虫生长状态，计算化蛹率及羽化率。 　　1.4 统计分析 　　实验数据以平均数与标准差（±s）表示，应用SPSS13.0统计软件分析处理。组间两两比较，采用单因素方差分析（One-way ANOVA），P0.05表示有统计学意义。 　　2 结果与分析 　　2.1 不同诱导方法对家蝇幼虫存活率及生长期的影响 　　幼虫诱导后，观察幼虫存活情况，记录幼虫发育到化蛹的时间。结果显示，相对正常对照组，各组家蝇幼虫经诱导处理后，存活率和生长期均降低。其中热刺激处理组幼虫存活率和生长期降低最为显著；冷热、超声及紫外照射刺激对幼虫的存活及生长影响相对较小（见表1）。 　　表1不同诱导方法对家蝇幼虫存活率及生长期的影响（n=3） 　　 存活率/% 生长期/h 　　正常对照 100 70.5±5.6 　　冷刺激 85.2±8.3** 32.5±5.4** 　　热刺激 74.1±7.5** 28.6±4.3** 　　冷热刺激 95.4±1.2** 65.3±6.2** 　　超声刺激 90.4±2.0** 52.3±5.2** 　　紫外照