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不同抗原修复液和固定时间对免疫组化结果的影响 　　【摘要】 目的 针对不同的抗原修复液与时间对免疫组化所产生的影响进行探讨。方法 取出26例乳腺浸润性导管癌标本试样。其中的每例中附着4个时间点，这四个时间点组分别为：立即固定组，延迟12小时固定组，延迟24小时固定组和延迟48小时固定组。依次对所选取4块肿瘤组织，在肿块部位进行固定、脱水、透明、浸蜡、包埋和切片等相关操作，利用行HE染色方法验证试验中的肿瘤组织，再通过抗原修复液展开免疫组化验证实验。结果 CK7、ER和C-erbB-2在4组试样在不等的时间和不同的抗原修复液的乳癌组织间表现出了不同的效果，并且结果的差异可以从统计学角度进行分析。结论 在本实验中，所进行延迟固定的组织，在通过充分固定和进行选取抗原修复液A[高温高压EDTA（pH9.0）缓冲液修复）]、抗原修复液B[高温高压EDTA（pH8.0）缓冲液修复]、抗原修复液C[高温高压柠檬酸盐（pH6.0）缓冲液修复]和抗原修复液D[微波炉EDTA（pH9.0）缓冲液修复法]的前提下能够进行免疫组化检测，但需要注意的是尽量减少和避免延迟固定时间。 　　【关键词】 抗原修复液；固定时间；免疫组化 　　doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2012.08.089 文章编号：1004-7484（2012）-08-2487-02 　　随着医学技术和相关领域的不断发展，免疫组织化学技术作为一门新兴的学科出现了。它是一门基于免疫和分子生物学与病理形态学等学科综合的技术，主要是通过已知抗体或抗原进行对实验中的组织细胞中探测的抗原或抗体检测。典型特征包括操作易于实现，准确性高和特异性强，并且能够将形态和机能相互整合。该种技术已在实际中能够进行病理和鉴别诊断，组织胚胎和神经解剖等相关领域的实验研究[1]。通常情况下，只有在正确及时的固定离体组织前提下，免疫组化技术才能得出精确度高的实验结果。但是，由于实际操作中存在大量的影响因素造成不能正确及时的固定离体组织，特别是在进行尸检标本时，对实验的要求更高。本文的研究重点就是考察这些组织是否能够做免疫组化实验，对于不同抗原修复液和固定时间对免疫组化结果的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 一般资料 采集本院在2008年1月至2009年12月手术中送检，并且确诊为乳腺浸润性导管癌的26例标本。在实验中，每一标本中选取4块肿块部位，其中的四个时间点分别是：t1，t2，t3和t4。t1，t2，t3和t4分别代表立即固定组，延迟12小时固定组，延迟24小时固定组，延迟48小时固定组。将其中的1块标本马上置于10%的中性福尔马林液中进行固定，并将实验中的其余3块分别于延迟12、24、48小时后放入10%中性福尔马林液进行固定。然后对于以上标本固定满24小时后进行脱水、透明、浸蜡和包埋相关操作，再进行切片行HE染色验证肿瘤组织。并且将染色结果为阴性者立即固定组免疫组化，同时不再做与其相应延迟固定组的标本标记染色。 　　1.2 试剂与方法 采用的试剂包括：鼠抗人CK7单抗，抗人C-erbB-2，单抗兔抗人ER单抗和鼠及ElivisionTM plus（即用型检测试剂盒和DAB试剂盒均购于福建迈新生物技术开发有限公司）。采用两步法进行免疫组化，即分别用柠檬酸高压热修复和胃酶修复，并且严格按照ElivisionTM plus试剂盒要求的操作步骤进行操作。其中，脱水透明，中性树胶封片，DAB显色和苏木素轻度复染，并且用PBS进行替换一抗作为阴性对照。其中，不同抗原修复液分组：pH为9.0的高温高压EDTA缓冲液修复（A），pH为8.0高温高压EDTA缓冲液修复（B），pH为6.0高温高压柠檬酸盐缓冲液修复（C），pH为9.0微波炉EDTA缓冲液修复（D），pH为8.0微波炉EDTA缓冲液修复（E），pH为6.0微波炉柠檬酸盐修复法（F）。 　　1.3 结果判定 进行阳性定位在细胞浆和阳性定位在细胞核的免疫组化切片，将其中具有特征代表的10个在400倍视野中观察，对其中的阳性细胞占整体细胞的比例进行计数如下：计阳性细胞数占整体细胞比例在25%以下记做（±），占整体细胞比例在25%-50%记做（+），占整体细胞比例在50%-75%记为（++），占整体细胞比例在75%以上记为（+++），并且相应的评价分为1，2，3，4分；同样的，以（±），（+），（++）表示染色强度，并且相应的评价分为1，2，3分。最后，将两种记分乘积作为染色效果指数。另外，对阳性定位于细胞膜的免疫组化进行切片，其中的染色效果参照文献[2]标准判定，同样的以符号±，+，++，+++，++++进行评价，并且相应的评价分为1，2，3，4，5分，将两种分数的乘积作为染色效果指数。 　　1.4 统计学分析 基于统计软