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一种高质量的红毛丹基因组DNA提取方法 　　摘 要 为了提取高质量的红毛丹基因组DNA，本研究以红毛丹叶片为试材，比较改良CTAB法、改良SDS法和试剂盒法对红毛丹叶片DNA的提取效果。结果表明：3种方法均可从红毛丹叶片中提取DNA，但由于改良CTAB法通过多次洗涤，并联合使用PVP和β-巯基乙醇处理，可有效去除红毛丹叶片中的多糖、多酚和蛋白质等物质，所获得的DNA纯度高且完整性较好，可用于SRAP-PCR等分子标记分析。此结果为后续分子生物学等相关研究奠定了基础。 　　关键词 红毛丹 ；DNA提取 ；改良CTAB法 ；SRAP 　　分类号 Q949.755.5 　　A High-quality Extraction Method for Genomic DNA of Rambutan 　　（Nephelium lappaceum） 　　LIN Xinge1） GE Yu1） ZHOU Zhaoxi1） 　　ZANG Xiaoping1） WANG Jiashui1） XIAO Zhengxin2） MA Weihong1） 　　（1 Institute of Banana and Plantain， CATAS， Haikou， Hainan 570102； 　　2 Bureau of State Farm， Baoting， Hainan 572300） 　　Abstract To obtain high-quality rambutan gDNA used for SRAP-PCR analysis， total DNA was comparatively extracted from fresh leaves by using variant methods of the improved CTAB， improved SDS and a commercial plant genomic DNA Kit respectively. The results showed that all three methods were available for DNA extraction from rambutan leaf， but improved CTAB method by adding β-mercaptoethanol and PVP with rinse and two times washing， could effectively remove polyphenols， polysaccharides， protein and other substances of samples. The yield high-quality DNA from fresh leaves could be used for SRAP-PCR analysis. 　　Keywords rambutan （Nephelium lappaceum） ； DNA extraction ； improved CTAB method ； SRAP 　　红毛丹（Nephelium lappaceum）属无患子科（Sapindaceae）韶子属（Nephelium）热带多年生常绿乔木植物，原产于马来西亚和印度尼西亚，是著名的热带珍稀水果之一，与荔枝、龙眼同科，现广泛分布于东南亚、中美洲等地区[1]。红毛丹的果皮多毛，果壳含抗氧化和抗菌活性成分，果肉富含磷、镁、硫、钙、锌、铁和锰，具有极高的食用和药用价值[2-4]。目前，红毛丹的研究范围主要集中在栽培、繁殖、病虫防治、果实采后保鲜、化学成分分离提取等应用技术方面[5-7]，而在无性系资源评价、育种改良、基因组变异、重要性状遗传与分子形成机制等基础领域的研究尚未开展。借助分子标记技术，检测基因组DNA水平的遗传变异已成为物种进化分析、种质资源评价、分子遗传育种等研究的重要策略。而提取高质量的DNA是开展相关工作的技术基础。 　　随着现代分子生物学的巨大进步，已经发展出许多植物DNA提取的方法，广泛应用的CTAB 法、SDS 法、尿素法等均通过裂解植物细胞，释放蛋白质等内含物于有机溶剂中，从而使核酸分离在水相中。但由于不同物种、部位在组织结构、化学成分等方面存在差异，不同方法对具体实验材料的提取效果差异很大。红毛丹的组织细胞中含有大量的多酚、多糖及其他脂类、色素等次生代谢物质[8-10]，采用常规方法分离出来的DNA易被多酚氧化呈现褐色，同时由于DNA溶液粘稠，采用多次酚-氯仿抽提也不能得到高质量的DNA，并且在多次抽提过程中易受机械剪切作用而发生降解，不能作为PCR模板进一步分析使用。本试验通过对比改良CTAB法、改良SDS法和商品化试剂盒3种方法的提取效果，旨在选