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丁香油抗炎镇痛效果的研究 　　摘要：指出了丁香油是从中药丁香中提取出来的挥发油，文献报道其主要作用是抑菌消炎，但尚未见有报道研究其镇痛效果及可能机制。研究中用完全弗氏佐剂CFA注射大鼠足底皮肤诱致疼痛作为无菌性的可持续疼痛模型，检测了丁香油的消炎特别是镇痛作用；并在细胞水平上进一步验证了丁香油主要成分丁香酚对炎症的抑制作用。研究证明：丁香油通过抑制COX|2上调，可以减轻CFA注射大鼠诱发的足底肿胀、热痛觉过敏，表明丁香油具有进一步开发为改善慢性疼痛药物的潜质。 　　关键词：丁香油；抗炎；镇痛；COX|2 　　中图分类号：R285 　　文献标识码：A文章编号2017 　　1引言 　　慢性疼痛显著地降低了罹患癌症和糖尿病等慢性疾病病人的生活质量，使得本来就重担在身的生活雪上加霜。因而，在临床研究中，如何能发现更有效的镇痛药是一个巨大的挑战[1，2]。另外，市售镇痛药常有很多副作用，如胃肠道反应、嗜睡、瘙痒、成瘾性和呼吸抑制等[3]。为此，寻找并发现新型高效的具有更高安全性的镇痛药也是医药界的一大难题。最近许多相关研究发现，某些中草药或中草药提取物能有效的治疗或缓解疼痛，如苦参提取物，青风藤提取物[4]，以及传统上用于止痛的25种植物[5]。 　　本研究涉及的中药丁香是桃金娘科番樱桃属植物丁香的干燥花蕾，又名公丁香，别名丁子香等。味辛、性温，归脾、胃、肺、肾经；为食药两用中草药，也是名贵香料[6]。丁香油是从丁香中分离提取得到的芳香性挥发油，是主要的抑菌成份。丁香油主要成分已经鉴定出，分别是丁香酚、β-石竹烯和乙酰基丁香酚[7]。丁香油主要用于化妆品，食品芳香剂、防腐剂，临床主要用于牙痛、风湿性疼痛及一些菌性炎症[8]。 　　目前，尚未见评估丁香油改善炎性疼痛作用的研究。本研究利用大鼠的足底炎性疼痛模型，引入两种不同的评价方法来测试丁香油抗炎和镇痛作用。此外，还在细胞水平上检测了与炎症诱导密切相关的分子环氧化酶COX|2的表达水平[9]。 　　2实验材料和方法 　　2.1实验仪器 　　热痛仪（意大利Ugo Basile）；足趾肿胀仪（成都泰盟）；水置换体积计（PV-200；成都泰梦软件有限公司，中国成都）；电泳仪（美国，BIO-RAD）；等。 　　2.2??验试剂 　　完全弗氏佐剂（CFA，美国Sigma公司）；生理盐水（武汉滨湖双鹤药业）；双氯芬酸钠（北京诺华）；丁香油和气相色谱-质谱（GCMS）丁香油的结果由无限极（中国）有限公司，广州。所有其他试剂均购自Sigma-Aldrich，USA。 　　2.3实验动物 　　在实验开始之前，将96只年轻雄性Wistar大鼠（190～250 g）在无病原体实验室饲养7 d，保证实验室12 h光-夜循环，温度为22～25℃。许可证号：SCXK（鄂）2008-0005，合格证编号：No.42000600004036。 　　2.4实验方法 　　2.4.1丁香油的分离提取 　　2.4.1.1蒸馏丁香油 　　将干燥丁香花蕾（购自中国广西药品广西中药广州药业中药厂）粉碎并与水以1 g∶10 mL混均。然后，在蒸汽蒸馏装置中蒸馏混合物8 h得丁香油。 　　2.4.1.2 GCMS分析丁香油 　　将丁香油（0.103 g）置于装有正己烷（色谱纯）的10 mL容量瓶中定容并混均。取上述溶液0.5 μL进样到GC。检测器为质谱选择性Agilent 5975 检测器，并耦合GCMS分析装置Agilent 7890（II）GC。用HP-5MS毛细管柱分离挥发性化合物。温度由40℃ （1 min） 以5℃/min升到220℃，并保持1 min；载气为氦气，流速为1.0 mL/min。分析丁香挥发油时，使用分流模式，比例为1∶60，喷射器温度为240℃，所有样品一式三份进行分析。用正烷烃计算保留指数（RI），通过比较其RI相对于从HP-5MS柱获得C4-C30正烷烃的值来鉴定组分；并将所得结果与NIST质谱提供的数据库进行比较，当质谱和RI值良好匹配时，确定正确识别组分。 　　2.4.2炎症性疼痛模型 　　将大鼠随机分为对照组（替代CFA的生理盐水注射）和CFA诱发的炎性疼痛组（CFA注射），不同组详细内容见“结果”部分。将150 μL CFA皮下注射到大鼠左后足底部，诱导炎症性疼痛；对照大鼠注射等体积生理盐水。注射CFA后，将对照组大鼠随机分为3组（对照组），分别在第1周，第2周或第3周结束时处死。同时将CFA组随机分为CFA处理组（CFA），CFA处理连续灌胃双氯芬酸钠组（CFA+diclo，30 mg/kg/d，诺华，北京），以及CFA处理连续灌胃丁香油组（CFA+ Clove Oil，10 mg/kg）。这些大鼠也分别第1