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不同方法提取银杏叶活性物质抑菌效果的比较研究 　　摘要：本试验采取常压煎煮、高压煎煮、乙醇冷浸渍、微波提取四种方法提取银杏叶活性物质，并选择金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及枯草芽孢杆菌三种菌检测银杏叶提取物的抑菌效果。结果表明，银杏叶提取物具有一定的抑菌效果，且其抑菌效果随提取方式、菌种和浓度的不同而有差异，温度对其抑菌效果没有影响，银杏叶活性物质显示出良好的热稳定性。 　　关键词：银杏叶提取物；抑菌效果；抑菌圈 　　中图分类号：R282.710.5　文献标识号：A　文章编号：1001－4942(2010)04－0062－03 　　 　　银杏又名公孙树、白果树、鸭脚子树、灵眼等，为银杏科银杏属落叶高大乔木。银杏中含有多种化学成分，其中具有药用价值的成分主要为黄酮类化合物、萜内酯类化合物和酚酸类化合物，另外还含有丰富的蛋白质、多种维生素、胡萝卜素和钙、磷、硼、硒等营养保健成分。到目前为止已知其化学成分的银杏叶提取物多达160余种，主要有黄酮类、萜类、酚类、生物碱、聚异戊烯、奎宁酸、亚油酸、蟒草酸、抗坏血酸、a－已烯醛、白果醇、白果酮等。此外，利用银杏叶研制的银杏叶饮料、银杏桃果汁、银杏啤酒、银杏茶等保健品已在市场上流通，并取得了良好效果。 　　近年来，银杏叶提取物(以下简称EGb)的药用和临床治疗价值，推动了国内外医学界对它的深入研究。随着化学检测手段及临床应用的深入研究，在银杏叶的制剂工艺、成分分析、药理作用、毒理实验和临床试验等方面国内外都有许多报道。但对于银杏叶提取物抗菌作用的研究，迄今鲜有报道。本文详细介绍了采用不同提取方法提取的银杏叶活性物质对常见菌的抑制作用，阐明了其抗菌特性，以期为银杏叶提取物在医药、食品等抗菌防腐方面的开发利用提供参考。 　　 　　1　试验方法 　　 　　1.1　银杏叶活性物质的提取 　　1.1.1　银杏叶的处理洗涤去杂：除去银杏叶中的杂物和泥沙，洗涤时间不宜过长，以免有效成分流失，一般控制在3～5 min；洗净后沥干除去部分水分，使银杏叶含水60％～70％，含水量过多会降低浸提溶剂的浓度，影响浸提效果。切碎：切成宽约0.5 cm的细丝较合适，过粗不利于有效成分的浸提，过细影响实验操作。 　　1.1.2　提取方法常压煎煮法：将20 g银杏叶、200 ml水加入锥形瓶中，100℃水浴3.0 h；高压煎煮法：将20 g银杏叶、200 ml水加入锥形瓶中，121℃湿热、0.105 MPa压力煎煮3.0 h；乙醇冷浸渍法：将20 g银杏叶、200 ml酒精加入锥形瓶中，室温放置，浸渍抽提3次，每次5天，最后将过滤后回收的乙醇合并收集；微波提取法：将20 g银杏叶、200 ml水放入锥形瓶中，火力1.0，每次30 s，加热14次，共计7 min。 　　1.1.3　除杂将上述药液分别装入10 ml离心管中，离心5 min，转速为4000 r/min，收集三种水提液及醇提液。 　　1.1.4　浓缩常压浓缩法得提取原液(每1 ml提取液对应1g银杏叶)，密闭储藏备用。 　　1.2　抑菌效果的检验 　　菌悬液的制备：分别取试验菌种(见表1)，接种于斜面培养基试管中，37℃培养18～20 h活化后，加入2ml无菌水，充分振荡得菌悬液。将采用不同方法提取的EGb原液分别制成8倍、4倍、 　　 　　 　　2　倍稀释液和浓缩一倍的提取液。 　　 　　抑菌圈的测定(滤纸片法)：将滤纸制成直径为6 mm的圆片，干热灭菌备用；用无菌移液枪吸取各自适宜浓度的菌液0.2 ml滴在平皿中央，然后将45℃左右的牛肉膏蛋白胨培养基倾注入平皿，充分混匀待凝；用无菌镊子夹取上述滤纸片分别蘸取不同浓度的EGb提取液，然后放入平皿培养基中，每皿3片，用无菌水及乙醇作对照。37℃培养18～20 h。量取滤纸片周围抑菌圈直径，比较不同提取方法、不同浓度的EGb提取物对不同菌种的抑菌效果。 　　 　　1.3　温度对EGb抑菌效果的影响 　　取用4种方法提取的EGb原液于121℃湿热灭菌，以金黄色葡萄球菌作为试验菌，试验方法同 　　1.2　测定滤纸片的抑菌圈的大小。 　　 　　2　结果与分析 　　 　　2.1　不同提取方法、不同浓度的EGb对不同菌种的抑菌效果 　　从表1可以看出，银杏叶提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌均有一定的抑制作用，但是由于提取方法、提取物浓度以及菌种种类的不同，EGb所显示出来的抑菌效果也各不相同。 　　以各种提取方法的1倍浓缩液对于大肠杆菌的影响为例(图1)，可以看出用乙醇冷浸渍法提取的银杏叶活性物质抑菌效果最明显，微波提取法次之，以后依次为高压煎煮法和常压煎煮法。其它方法提取的不同浓缩液对其它菌种也显示出相似的结果，未一一列出。其原因可能是乙醇冷浸渍法比较