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两种广谱性植物病毒病原鉴定的研究进展 　　摘要：植物病毒因其危害大，防治又很困难，故有“植物癌症”之称。几乎每种农作物、经济作物及观赏园艺植物都会受到病毒的危害，病毒病已成为制约作物和园艺植物优质、高产的重要因素。本文对黄瓜花叶病毒、番茄斑萎病毒两种广谱性植物病毒的基本特性、表现症状及目前国内外对该病毒的检测技术研究进展进行了阐述，为进一步开展植物病毒病的研究奠定基础。 　　关键词：黄瓜花叶病毒；番茄斑萎病毒；病毒检测 　　 　　目前发现的植物病毒种类已达700多种，几乎所有作物都会受到病毒的危害，病毒病已成为制约作物和园艺植物优质、高产的重要因素。由于还没有一种治疗效果较理想的药剂，特别是对于因植物RNA病毒高度变异性而产生的新病毒或新株系，目前人类还是不能进行有效预测，因此对病毒病害的控制主要通过采用无毒种子、脱毒苗木和繁殖材料、清除感病植株及其传毒介体以及植物检疫措施防止带毒材料的输入等方法。 　　黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus，CMV)、番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus，TSWV)两种病毒的寄主范围广，对植物的危害极大，并且这两种病毒常常是复合侵染。本文将对这两种植物病毒的基本特性、表现症状及目前国内外对该病毒的检测技术研究进展进行阐述。 　　 　　1、黄瓜花叶病毒 　　 　　1.1基本特征 　　黄瓜花叶病毒属雀麦花叶病毒科(Bromoviri-dae)黄瓜花叶病毒属(Cucumovirus)。黄瓜花叶病毒(CMV)是一种非常严重的病毒病害，其病毒可以到达除生长点以外的任何部位，是寄主范围最多、分布最广、最具经济重要性的植物病毒之一，全世界所有烟草种植区均有该病毒的分布和危害。病毒粒子等大，无包膜，直径为29nm，圆形轮廓，无明显衣壳粒。病毒粒子由18％核酸和82％蛋白质组成。基因组由单链RNA组成，线型，大小约为8.621kb，有3个独立的RNAs链。CMV基因核苷酸基本组成24％G、23％A、23％C和30％U，目前CMV的全部核苷酸基因序列已被报道，并基于生物学、血清学和分子生物学的基础上，将CMV分离物大致分为Ⅰ和Ⅱ两类。 　　黄瓜花叶病毒大田期的典型症状有：①心叶上表现明脉症，叶片颜色深浅不均黄绿相间，形成典型的“花叶症”。②上部叶狭窄、扭曲，表皮茸毛脱落，失去光泽，叶柄拉长，叶缘上卷叶尖细长，呈“畸形状”。③有时病叶上出现深绿色的“泡斑”。④中部叶或下部叶可“闪电状坏死”，褐色至深褐色。⑤小叶脉或中脉形成深褐色或褐色坏死。 　　1.2病毒检测 　　在植物病毒检测时，用于检测CMV的方法主要有指示植物法、ELISA法、电镜法和PCR技术。刘文洪，洪健等通过对百合中的黄瓜花叶病毒进行寄主接种试验后称：侵染百合的CMV可能对百合植物产生了寄主适应性变异，丧失了通过汁液摩擦接种传播的特性。同时也表明复合侵染的线状病毒也不能通过汁液摩擦侵染指示植物。梁巧兰，魏列新等选用以聚苯乙烯微量反应板为载体的双抗夹心P-ELISA(DAS-ELISA)、间接-ELISA(Ⅰ-ELISA)和以硝酸纤维素膜为载体的点免疫结合测试法(DIBA-EL ISA)3种血清学方法检测观赏百合叶片中的CMV，得出DAS-ELISA的灵敏度最大，是间接ELISA和DIBA-ELISA灵敏度的4倍；而这3种方法对CMV的检出率有明显差异，DIBA-ELISA的检出率最高，为66.67％，间接-ELISA的检出率为38.09％，分别比DAS-ELISA的检出率提高42.86％和14.28％。Devergne检测百合CMV时，出现了间接ELISA的检出率高于DAS-ELISA的检出率的现象。这可能是因为间接ELISA法比DSA-EL-ISA具有较宽的检测谱，间接法不受抗体株系限制。 　　杨超，孙秀东等在2008年的试验中以从CMV侵染的辣椒叶中提取的总RNA为模板进行反转录和PCR扩增，用健康辣椒叶片的提取液作为阴性对照。分别用两步法RT-PCR和一步法RT-PCR都能扩增出780bp左右的DNA带，而对照未出现任何扩增带。从而得出一步法RT-PCR和两步法RT-PCR都可以有效地检测出黄瓜花叶病毒的结论，而一步法RT-PCR的检测效果略好，灵敏度也略高。1998年S.K.Rai等用RT-PCR检测法检测出唐菖蒲中含有CMV病毒，并证明由于唐菖蒲球茎上存在着阻碍血清学反应的抑制剂，除EL ISA方法外，ISEM检测法和WBA检测法均检测不到唐菖蒲球茎上的CMV病毒；同时证明用RT-PCR技术可以对叶片汁液稀释浓度为1/10000的CMV病毒进行检测，而EL ISA对稀释浓度低于1/500的感病叶片无法进行病毒检测。 　　 　　2、番茄斑萎病毒 　　 　　2.