中药车前子对小鼠气囊滑膜炎细胞因子TNFα及IL12影响实验研究.docVIP

中药车前子对小鼠气囊滑膜炎细胞因子TNF-α及IL-12影响的实验研究 　　摘要：目的：研究中药车前子对小鼠滑膜炎的抗炎机制。方法：使用T.Mikamis方法用角叉菜胶给小鼠造模，应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法检测灌洗液中TNF－α、IL－12的含量变化。结果：中药车前子组TNF－α、IL－12含量低于对照组，有显著性差异（P0.01）。结论：车前子能通过抑制滑膜炎症中TNF－α，IL－12的含量进行抗炎。 　　关键词：创伤性滑膜炎；车前子；肿瘤坏死因子-α；白介素－12；细胞因子 　　中图分类号：R285.5 　　文献标识码：A 　　文章编号：1673-7717（2007）04-0816-03 　　创伤性滑膜炎是指关节损伤后引起的滑膜无菌性反应，是较常见的一种运动创伤。其主要症状为关节肿胀、疼痛、关节积液和关节活动受限。本病易反复发作，若迁延不愈，可导致滑膜粘连、肥厚、软骨萎缩，影响关节运动功能，对运动员的训练、比赛成绩有紧密影响。目前临床上常采用中药治疗，可以克服西药的毒副作用，疗效较好，不易复发。但中药用方复杂，标准不一，对临床应用造成很大困难。经研究发现中药车前子几乎是所有治疗创伤性滑膜炎方剂中首选单味药。为推进中药现代化标准化进程，本实验通过观察车前子对小鼠气囊滑膜炎灌洗液中的TNF和IL－12的影响，探讨中药车前子对创伤性滑膜炎的治疗作用，从细胞因子水平揭示其产生作用的机理。 　　 　　1研究对象 　　 　　BALB／c小鼠(6～8周龄，体重18～22g)购自辽宁中医药大学动物实验中心。 　　 　　2研究方法 　　 　　2．1实验药物中药车前子由辽宁中医药大学附属医院药局提供，剂型为颗粒剂。将其加入注射用水中制成50％的溶液经高温消毒后封瓶，置冰箱中保存备用。对照组药物采用滑膜炎冲剂，购于辽宁中医药大学附属医院药局，产地河北省张家口市，批号为(020714)，用注射水配制成50％的溶液备用。无钙镁Hanks液的配制：剂量为1000g，将氯化钠8g，氯化钾0.2g，柠檬酸三钠1g，磷酸二氢钠0.05g，碳酸氢钠1g，葡萄糖1g，依次溶解去离子水中，滤过除菌后置于-4℃的冰箱中备用。角叉菜胶(carrageenan Car)购于辽宁工业药物研究所。取2g药物粉末加入200mL注射用水，加温搅拌成10mg／mL(1％)水溶液。 　　2．2试剂盒及检测设备 试剂盒，由北京晶美生物制剂公司提供，酶标仪等检测设备由辽宁中医学院基础部中心实验室提供。 　　2．3实验动物饮食各组 小鼠均在相同条件下自由饮水、摄食。饲料来源沈阳第一制药厂动物饲养中心提供的小鼠颗粒饲料，其成分：青稞、豆饼、麸皮、米糠、骨粉、食盐。 　　2．4实验动物分组将40只小鼠随机分为正常对照组(A组)，模型组(B组)，滑膜炎冲剂组(C组)，车前子组(D组)。?2．5造模方法按照Mikami T［1］法，即将小鼠背部皮下注射空气5mL，第3天及第6天再次注入空气各3mL，维持气囊的膨胀连续7天，于末次给药后2h向气囊内注射Car25mg／kg(正常组给予等量溶媒)诱导炎症。 　　2．6给药方法40只小鼠正常饲养1周后，B、C、D 3组按上述方法造模，于首次注射空气的当天起经口给予C组滑膜炎冲剂，D组车前子颗粒水溶液，连续7天。根据人用药量与实验动物计算出每只小鼠每次灌胃0．5 g／kg，每日2次。 　　2．7取材方法致炎后2h活杀小鼠，背部气囊内注入4mLHBSS灌洗，收集灌洗液并置于已硅化试管中。经大体观察记录后即离心(4℃，1800r/min，10min)收集上清液-70℃储存备用。 　　2．8观测指标①大体观察灌洗液的颜色等物理特性。②TNF－α变化用双抗体夹心酶联免疫实验(ELISA)检测。③IL－12变化用双抗体夹心酶联免疫实验(ELISA)检测。 　　2．9统计学处理各组数据所测得值以均数±标准差?(±s)?表示，方差齐者做方差分析，方差不齐者做秩和检验。 　　 　　3结果 　　 　　3．1灌洗液观察见表1。正常情况下，滑液量少，清亮透明。A组为正常对照组，故呈现的情况与上述一致。B组为造模组，滑液渗出较多，白细胞和蛋白质渗出增加，与急性炎症的情况反应一致。C组、D组因为用药滑膜炎症减轻，渗出减少。因而可大体推断滑膜炎冲剂和车前子组均有抑制炎症的作用。?表1灌洗液观察组别量颜色清量度黏性自发凝集A组少清透光很高不B组多黄不透光低常见C组较多草黄微透光一般常见D组较多草黄微透光一般常见3．2灌洗液中TNF的含量见表2。表2显示造模后，各组灌洗液中TNF、IL－12的含量。其中模型组与空白对照组比较TNF、IL－12含量显著高于空白对照组P0．05。?表2灌洗液中TNF和IL-12的含量组别剂量（mg