乳腺癌中Bmi―1Mel―18表达及病理意义.docVIP

乳腺癌中Bmi―1、Mel―18的表达及病理意义 　　摘要：目的：探讨Bmi-1、Mel-18在乳腺癌组织中的表达，以及与病理特征的意义。方法：选取36例乳腺癌患者病理组织与36例健康人群乳腺组织，对两组组织标本进行处理，观测Bmi-1、Mel-18的mRNA、蛋白表达，分析与病理特征的关系。结果：两组Bmi-1、Mel-18的mRNA、蛋白表达对比，差异均有统计学意义（P0.05）。结论：当Bmi-1表现为高表达时，Mel-18呈现为常低表达，两者与乳腺组织恶性病变存在关联，故对两者进行联合测定，在临床诊治中具有一定的应用价值。 　　关键词：乳腺癌；Bmi-1；Mel-18 　　B细胞特异的莫罗尼白血病插入位点1基因（Bmi-1）作为多梳基因家族（PcG）的重要成员，属于原癌基因，定位于染色体畸形相关区域，在各种肿瘤疾病的形成和发展中，都起到了非常重要的作用。黑色素瘤核蛋白质（Mel-18）同样被称之为多梳基因环指蛋白2（PCGF2），Mel-18蛋白与Bmi-1蛋白有着93%的同源性，而基因则与Bmi-1有着70%的同源性。有报道指出Mel-18可能属于一种癌基因，但同时也有报道证实其属于抑癌基因，但其在肿瘤发展中发挥了重要作用[1]。鉴于此，本研究通过实验，对Bmi-1、Mel-18在乳腺癌组织中的表达进行了解，并分析其病理意义，旨在为乳腺癌的临床诊治提供新方向。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　选取广东药学院附属医院2014年1月-2015年3月接诊的乳腺癌手术治疗患者，选取36例，患者年龄为24-66岁，平均年龄为（50.22±13.05）岁；根据AJCC第6版分期标准[2]对乳腺癌进行分期：4例Ⅳ期，7例Ⅲ期，11例Ⅱ期，14例Ⅰ期；所有患者术前均未接受任何治疗，且经术后病理组织标本确诊。另从同期健康女性中，选取36例作为对照组，取正常乳腺组织，且经病理学诊断均为正常组织。所有标本均在离体30min内完成采集，分别取2份，1份采用10%福尔马林溶液对其进行固定处理，经石蜡包埋处理和切片备用；1份置于液氮内，放置于-80℃环境下保存。两组均签订知情同意书。 　　1.2 方法 　　1.2.1 RT-PCR实验 运用Trizol对各乳腺组织总RNA进行提取。购入Bmi-1、Mel-18上下游引物。PCR反应条件：经94℃行2min预变性，同温度下行30s变性；经48℃行30s退火；经72℃行45s延伸；再次经94℃行30s变性；经48℃行30s退火；经72℃行45s延伸。按照上述方法连续进行35个循环处理后，再进行10min延伸处理；对PCR反应后产物进行电泳处理，同时采用凝胶显像对结果进行分析，同时通过β-actin片段灰度值和基因片段的比值，来作为相对表达水平。 　　1.2.2 免疫组织化 购入Bmi-1抗体、Mel-18抗体，浓度设定为1：100。对组织切片进行脱蜡水化处理；运用3%对其行灭火内源性过氧化物酶处理；采用柠檬酸修复抗原，血清封闭，向其中加入一抗，置于4℃环境内过夜。采用磷酸盐缓冲液对抗体进行替代，并将其作为空白对照，在经过二氨基联苯胺行显色处理后，采用苏木素进行反复的复染和水洗，使其能够完全透明，并通过中性树胶封片，进行镜检。根据染色强度进行计分，标准为：4分（重度染色）；3分（中度染色）；2分（弱染色）；1分（阴性）；对两者相乘结果作为判断依据，若结果≥4分，即可判定为阳性表达，反之则为低表达。根据着色细胞数/视野细胞总数×100%进行计分，标准为：4分（75%）；3分（51%-75%）；2分（11%-50%）；1分（≤10%）。 　　1.3 统计学方法 　　选取统计学软件SPSS20.0对本研究数据进行统计分析。以均数±标准差（X+S）表示RT-PCR结果，运用LSD法对组间结果进行检验；采用卡方对蛋白表达进行检验；若P0.05，即表示差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 乳腺癌组织中Bmi-1、Mel-18的mRNA表达 　　对照组乳腺组织Bmi-1 mRNA表达量为（0.598±0.05），Mel-18 mRNA表达量为（0.941±0.046）；乳腺癌组患者乳腺组织Bmi-1 mRNA表达量为（0.934±0.063），Mel-18 mRNA表达量为（0.617±0.023）。两组Bmi-1、Mel-18的mRNA表达对比，差异均有统计学意义（P0.05）。 　　2.2 乳腺癌组织中Bmi-1、Mel-18的蛋白表达 　　对照组乳腺组织Bmi-1蛋白表达率为31.2%，Mel-18蛋白表达率为72.6%；乳腺癌组患者乳腺组织Bmi-1蛋白表达率为80.4%，Mel-18蛋白表达率为27.3%。两组Bmi-1、Mel-18蛋白表达对比，差异均