低温保存对4种作物种子超弱发光特性影响规律研究.docVIP

低温保存对4种作物种子超弱发光特性影响规律的研究 　　摘要：为探索超弱发光特性（UWL）与种子活力之间的相关性，并为研究种子活力无损测定新方法提供技术依据，对不同保存年限的玉米、小麦、大豆、水稻种子进行超弱发光和延迟发光测定，并通过数据统计、曲线拟合及作图，分析种子超弱发光特性与低温保存时间的关系及延迟发光的变化特征。结果表明，同一品种不同保存年限的种子超弱发光能力差异明显，随保存延长超弱发光强度逐渐下降，与发芽势变化呈现极强的正相关；种子的延迟发光呈现随贮藏年限延长强度降低而衰减系数先增大后减小的特征。 　　关键词：低温保存；作物种子；超弱发光；种子活力 　　中图分类号：S510.1文献标识号：A文章编号：1001-4942（2014）12-0038-05 　　种子活力检测方法的种类多达数十种，归纳起来不外乎直接法和间接法，即通过发芽试验测定田间出苗率的方法和生化方法，这些方法繁琐、耗时长，会破坏组织以及物理、化学结构，且要求操作人员具备较高的专业操作水平，属有损检测方法。特别对于稀有种子，发芽试验测定将造成不可挽回的资源损失，因此在种质资源保存领域需要一种快速、高效、无损的种子活力检测方法。 　　生物组织或细胞在生命活动的代谢过程中，都自发地辐射出一种极其微弱的光子流，这是一种极微弱的准连续光子辐射[1]，是生物在生命活动中出现的一种机体自身发光，其强度为每秒每平方厘米上几个至几千个光子，波长180～800 nm，称为生物系统的代谢超微弱发光（Ultra-Weak Luminescence，UWL），是所有活的生物都具有的一种普遍现象[2]。生物代谢的超弱发光广泛存在于动植物中，反映了生物体与生命活动过程的有关信息。生物超弱发光通常包括两部分：一种为自发的超微弱发光，与生物体的代谢有关；另一种为外因诱导发光称为延迟发光（Delayed Luminescence，DL），如光、电离辐射、超声、化学药物等外界激励因素。自身发光和延迟发光与生物的新陈代谢状态和水平，细胞的分裂、死亡、变异以及细胞间信息的传递等许多基本的生命过程都有着内在的联系，是反映生物体内部机能的一个重要窗口[3]。基于以上，通过超微弱发光特性检测种子基础代谢（反映种子的活力）与保存时间的关系，在不破坏被检测种子的物理和化学结构情况下，对种子进行无损、快速检测，将为种质资源的安全保存与及时更新提供更为准确的技术依据[4，5]。 　　1材料与方法 　　1.1试验材料 　　从种子资源库（中期库）选取玉米郑单958、小麦济南16、大豆齐黄27、水稻香粳9407共4种作物种子，其保存时间分别为1、3、5、7、9年，保存温度为0℃。种子由中国农业科学院种质资源研究所国家种质中期库提供。 　　1.2试验方法 　　1.2.1发芽势及发芽率的测定取以上玉米、小麦、大豆、水稻净种子，按照《农作物种子检验规程》（GB/T 3543.3-1995）操作规程进行发芽试验，统计发芽势和发芽率。 　　1.2.2自身发光的测量从0℃中期库中取出种子，置于4℃保鲜箱中24 h缓慢升温，再置于25℃生化培养箱中缓慢升温并保持恒温，使之不因升温破坏种子的基础代谢，尽量保持种子保存时的自然状态。每个保存年限的种子样品分成3个平行组，其中玉米每组10粒、小麦50粒、大豆15粒、水稻70粒，以便使种子数量能够完全覆盖测量杯底并略有盈余。在进行试验前种子先置于暗室中30 min，取出后放入BPCL-2-ZL超微弱发光测量仪样品室的测量杯中进行自身发光的测定，时间为100 s，取每种样品3个平行组测量数据的平均值作为该样品的测量值，样品室温度设定为恒温25℃。 　　1.2.3延迟发光的测量由于自身发光主要反映种子的基础代谢特征，这对于判断种子活力并不全面，本试验进一步测量了种子的延迟发光特征。前人的研究发现新鲜种子采取的激励方法是日光灯或LED灯珠照射，照度只有几十勒克斯[7]。而本试验是经过较长时间保存的种子，较低的照度显然不足以对样品产生足够激励，为深入研究种子对外界激励的响应，需要较强的“唤醒”信号，故选择波长较宽的日光灯为光源，光照强度为4 000 lx。样品分组方式与自身发光测量相同，将待测样品依次放在日光灯下照射2 min后，迅速测定延迟发光光子数，每次测量100 s，样品室设定为恒温25℃。 　　2结果与分析 　　2.1发芽率、发芽势测定结果 　　由图1可知，玉米、小麦、大豆、水稻4种作物种子的发芽率随保存时间的延长逐渐降低，降低趋势一致，保存1～7年间缓慢降低，7年后显著降低。以玉米种子为例，保存1年的种子发芽率为97%，保存3、5、7、9年后的发芽率分别降低为96%、95%、93%和86%。 　　4种作物种子发芽势降低趋势也接近一致。图2反映出发芽势的降