免疫比浊法和免疫荧光定量法测定D―二聚体研究比较.docVIP

免疫比浊法和免疫荧光定量法测定D―二聚体研究比较 　　【摘 要】探讨免疫比浊法和免疫荧光定量法测定D-二聚体的可行性以及在临床的应用价值。 在STAGO血凝分析仪上采用免疫比浊法测定D-二聚体，在美国博适Triage检测仪上采用免疫荧光定量法测定D-二聚体，对两种不同方法测定D-二聚体进行比较。试验数据表明：免疫比浊法测定D-二聚体的重复性好于免疫荧光定量法；两种方法测定D-二聚体在线性范围、灵敏度、抗干扰能力接近，试剂稳定性均能保存一年；美国博适Triage检测仪的免疫荧光定量法使用方便，是一种准确、简捷的测定方法，适用于临床的急诊心肺功能五联检验；STAGO血凝分析仪的免疫比浊法定量检测D-二聚体含量方便、快捷，敏感性高，易在大多数医院普遍推广 　　【关键词】二聚体；血栓形成；免疫荧光定量法 　　【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1004―7484（2013）10―0074―02 　　D-二聚体（D-Dimer，D-D） 是纤维蛋白单体经活化因子XIII交联后，再经纤溶酶水解所产生的一种特异性降解产物，是一个特异性的纤溶过程标记物。只要机体血管内有活化的血栓形成及纤维溶解活动，D-二聚体就会升高。其对静脉血栓形成高度敏感，在排除静脉血栓形成的诊断中具有极其重要的价值。另外，D-D在心血管疾病、DIC、恶性肿瘤等疾病也有明显变化，足反映疾病严重程度、发展变化、以及疗效和预后的有用指标[1-2]在全血或血浆中，利用D-D的抗体可以很容易的检测到D-D含量。已建立了多种有价值的D-D的检测方法[3]。但临床上迫切需要一种取样简单、操作方便、时间节约、结果准确的D-D测定方法。其中临床实验室常规检测方法是免疫比浊法。笔者采用丽水中心医院检验科2种测定D-D的方法并加以对照分析，为临床采用正确的D-D检测方法提供依据，现报告如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 标本：样本来源于丽水中心医院门诊患者和病房患者2012年6月至12月收集的80例血清标本（其中无溶血、黄疸、乳糜的正常人血浆60例，无溶血、黄疸、乳糜的D-二聚体高值血20例，浓度在8～16μg/mL之间）。仪器采用法国STAGO血凝分析仪；美国博适Triage检测仪。 　　1.2 试剂：STAGO公司提供的免疫比浊法所用试剂、定标液和质控液；免疫荧光定量法所用试剂为杭州丽珠医疗器械有限公司生产。 　　1.3 方法：D-D测定在法国STAGO血凝分析仪上采用免疫比浊法，在美国博适Triage检测仪上采用免疫荧光定量法 。两种方法均按照试剂盒说明书、仪器说明书来设置相关参数进行测定。 　　1.4 统计学处理：应用SPSS20.0统计学软件，对所测有关精密度的数据进行正态分布检验，用均数±标准差（x±s）表示，进行成组t检验，对回收率进行卡方检验 。 　　2 结果 　　2.1 线性与灵敏度：取D-D配制浓度为6.0μg/mLD-二聚体标准液，用生理盐水稀释成5种不同浓度的标准液（0.25，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0）。分别用免疫比浊法和免疫荧光定量法测定D-D，进行线性试验。结果表明，免疫比浊法测定D-D，回归方程为y=0.024x+0.054，r=0.9992，线性关系良好。线性范围为0.22～4μg/ml。免疫荧光定量法测定D-D，线性范围为0.1～5μg/mL，回归方程为y=0.024 x+0.046，r=0.9996。在低于4μg/ml范围内两种方法测定D-D的线性范围接近。免疫比浊法的灵敏度为0.22μg/ml，免疫荧光定量法的灵敏度为0.1μg/mL。如需检测更高浓度的血浆D-D水平，则需对血浆标本进行预稀释。 　　2.2 精密度：将患者血浆配制为中、低2种不同浓度，各测20次。在STAGO血凝分析仪上采用免疫比浊法测定D-D.（D-D浓度在0.55±0.05μg/mL的CV为8.8%，D-D浓度在1.75μg/mL的CV值为5.0%）在美国博适Triage检测仪上采用免疫荧光定量法测定D-D（D-D浓度在0.68±0.07μg/mL的CV为10.8%，D-D浓度在1.80±0.11μg/mL的CV值为6.0%）。免疫比浊法的精密度优于免疫荧光定量法，两种检测方法在低、中浓度比较中有显著性统计学意义。结果见表1. 　　2.3 干扰试验：在体外向正常人血浆中加入不同浓度胆红素、脂肪乳、血红蛋白。根据加入干扰物质前后的测定值判断干扰因素的影响结果。当加入的最高浓度为血红蛋白5g/l，胆红素200mg/l，甘油三脂22.6mmol/l时两者的检测结果无影响。 　　2.4 回收率试验：取无黄疸、溶血、乳糜的正常人混合血浆，用免疫比浊法和免疫荧光定量法分别测定D-D，作为基值。加入D-D标准液0.555μg/mL，