冻水产品中单核细胞增生李斯特氏菌检验研究.docVIP

冻水产品中单核细胞增生李斯特氏菌检验研究 　　摘要对从湛江地区进出口水产品加工厂抽取的1158份冻水产品进行的单核细胞增生李斯特氏菌分析,本实验采用了全自动酶联荧光免疫分析仪筛选法进行了初步筛选,对分离菌株用API Listeria 试剂盒进行鉴定。经检验,1158个样品中有7个样品(0.60%)为单核细胞增生李斯特氏菌阳性,另有4个(0.35%)为 L.innocua, L.welschimeri 和L.grayi 阳性。本试验Vidas LMO检测试剂条呈现4个假阳性,经鉴定为李斯特氏菌属中L.innocua,L.welschimeri 和L.grayi,表明Vidas LMO检测试剂条存在一定的假阳性率。 　　关键词冻水产品 检验 污染 　　中图分类号:R155文献标识码:A 　　 　　1 前言 　　单核细胞增生李斯特菌 (Listeria monocytogenes,L.M)是一种胞内寄生菌,可引起人及多种动物致病。对人类而言 ,各年龄组均可感染而发病,但主要是免疫功能低下者最易受该菌感染,导致脑膜炎、败血症等疾病以及流产、早产、死胎等后果。食品,特别是海产品易被该菌污染,病人及无症状携带者也可成为传染源。据国外有关研究报道,由单核细胞增生李斯特菌引起的食物中毒案例已超过沙门氏菌,被 WHO列为二十世纪 90年代的四大食源性致病菌之一。单核细胞增生李斯特菌引起的食物中毒发病高峰在夏季和冬季,发病率在各地区之间存在差异,根据目前的报道,欧美等发达国家发病率较高,而亚、非、拉等发展中国家报道较少,这可能与这些国家的饮食习惯差异有关。付萍等于 1996～1997年组织了全国12个省份对国内七类食品3746份样品进行单核细胞增生李斯特菌的污染情况调查,结果表明:七类样品中除了蔬菜外均检出单核细胞增生李斯特菌,其分离率为:冷饮1.39%、生肉1.53%、乳制品0.52%、熟肉制品0.47%、乳0.72%及水产品0.19%。 　　2 材料与方法 　　2.1 仪器和试剂 　　法国生物梅里埃 (Biomerieux)公司 mini-ViDAS全自动荧光酶免疫分析仪;日本尼康(NIKON)生物显微镜;上海一恒科技有限公司隔水式恒温培养箱。Demi-Fraser肉汤,Fraser肉汤,PALCAM选择性培养基,科玛嘉李斯特菌显色培养基购自BD公司;VIDAS LMO试剂盒,API Listeria试剂盒购自广州千江公司。 　　2.2 样品来源 　　采自湛江市各进出口水产品加工厂,共1158份样品,包括冻罗非鱼片、冻熟带头虾、冻熟虾仁、冻熟凤尾虾、冻生带头虾和冻去头虾6个品种。 　　2.3 增菌培养 　　以无菌操作称取剪碎的水产样品 25 g,加于 225 ml Demi-Fraser肉汤中, 30℃ 培养 24 小时后,吸取 1 ml培养液于 10 mlFraser肉汤中,置30℃ 24小时进行第二次??菌培养。 　　2.4 分离和鉴定 　　用VIDAS LMO试条对样品进行初筛:全自动快速免疫检测仪(mini - VIDAS)的工作原理为酶联荧光免疫反应。吸取第二次培养物500l注入准备好的 VIDAS LMO试条,按 START SECTION启动键,待其自动出结果,阴性即可报告为未检出单核细胞增生李斯特菌;阳性者则按照国标法(GB/T 4789.30-2008第一法)进行分离培养和鉴定,本实验选择API Listeria生化鉴定试剂盒对分离菌株进行鉴定。 　　3 结果与分析 　　对从1158份VIDAS LMO试条阳性的样品中分离出来的典型和可疑菌株进行革兰氏染色镜检,运动性观察,动力试验,过氧化氢酶,氧化酶试验,溶血试验和 API Listeria 鉴定试验。经鉴定,在 1158个样品中,有11个(0.95 %)为李斯特氏菌属阳性,其中 7个(0.60 %) 为单核细胞增生李斯特氏菌阳性。在170个冻罗非鱼片样品中,5个(2.94%)为李斯特氏菌属阳性,其中4个(2.35%)为单核细胞增生李斯特氏菌阳性;在314个冻熟带头虾样品中,2个(0.64 %) 为李斯特氏菌属阳性,其中1个(0.32 %) 为单核细胞增生李斯特氏菌阳性;在220个冻熟凤尾虾样品中,1个(0.45 %)为李斯特氏菌属阳性,无单核细胞增生李斯特氏菌阳性;在284个冻熟虾仁样品中,3个(1.06 %)为李斯特氏菌属阳性,其中2个(0.70%)为单核细胞增生李斯特氏菌阳性;冻生带头虾和冻去头虾样品均无阳性(见表 1) 。 　　据报道,日本人对冻水产品污染单增李斯特氏菌的情况进行了调查,从2℃保存的货物中抽取100个样,其中有20(20%)个污染单增李斯特氏菌;从10℃保存的货物中抽取65个样品,有12(18.46%)个单增李斯