冰七片对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤保护作用研究.docVIP

冰七片对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤保护作用研究 　　【摘要】 目的：研究冰七片对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用，并初步探讨其作用机制。方法：Wistar雄性大鼠随机分为4组，即假手术组、脑缺血再灌注模型组（模型组）、尼莫地平对照组、冰七片治疗组。冰七片连续灌胃7 d，末次给药1 h后，采用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型，缺血2 h再灌注24 h后对大鼠神经功能进行评分，测定脑梗死体积，检测脑组织SOD和MDA含量。结果：与模型组比较，冰七片能够改善大鼠的神经功能障碍，缩小脑梗死体积，提高脑组织细胞SOD活性水平，降低脑组织细胞MDA含量。结论：冰七片对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有保护作用，其初步机制可能与提高脑组织SOD活性水平、降低脑组织MDA含量有关。 　　【关键词】 冰七片； 局灶性脑缺血再灌注； SOD； MDA 　　中图分类号 R743.31 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2016）1-0148-02 　　doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2016.1.083 　　缺血性脑血管疾病作为临床常见疾病，具有发病率高、致残率高、致死率高的特点，严重危害中老年人群的健康。在欧美发达国家，它与恶性肿瘤、心脏病并称为人类健康的“三大杀手”。随着我国人口老龄化程度的不断加深，缺血性脑血管疾病发病率呈逐年升高的趋势。据世界卫生组织（WHO）调查，中国每年新增缺血性脑血管疾病患者约200万，其中能存活下来者仅50万，约75%的存活患者遗留运动、失语、认知等功能障碍，其中重度残疾者约占40%，给家庭及社会带来沉重负担[1-2]。冰七片是我国中药保护品种，采用天山名贵药材天山龙盘七（三七）、天山龙脑香（冰片）配伍制成，临床用于治疗气滞血瘀的胸痹、胸痛、胸闷、憋气等冠心病多年。本实验观察冰七片对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用，并初步探讨其作用机制，现报告如下。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 　　清洁级Wistar大鼠64只，雄性，体重（220±30）g，由广西医科大学实验动物中心提供（合格证号：2006005）。 　　1.2 药品与试剂 　　冰七片（国药集团新疆制药公司，批号，尼莫地平片（广东华南药业，批号，氯化三苯四氮唑（TTC，上海励瑞生物公司），SOD检测试剂盒、MDA检测试剂盒（南京建成工程研究所）。 　　1.3 仪器设备 　　精密电子秤（上海第二仪器厂），酶联免疫检测仪（美国Bio-Rad公司），冷冻多用途离心机（德国Eppendorf）。 　　1.4 动物模型制备 　　大鼠随机分成4组：假手术组、脑缺血再灌注模型组（模型组）、冰七片治疗组和尼莫地平对照组，每组16只。冰七片以32 mg/（kg?d）、尼莫地平片以16 mg/（kg?d）与生理盐水溶解灌胃给药，连续7 d。模型组和假手术组灌胃等体积生理盐水。于末次给药后1 h，采用大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型[3]。大鼠清醒后，出现以下体征表明建模成功：左侧Homer氏征；右侧前肢瘫痪。将鼠尾提起，大鼠不能充分伸展右前肢，当大鼠右旋时其右前肢拖在腹下，与左前肢交叉成剪刀状。 　　1.5 指标检测 　　（1）神经功能学评分：大鼠脑缺血2 h再灌注24 h后，每组随机取8只，采用Bederson方法，对大鼠的神经缺损进行评分，满分为4分，评分越高，表明神经功能障碍越严重。（2）脑梗死体积测定：将神经功能学评分后的大鼠，断头取脑，将大脑作连续2 mm冠状切片，共4片，然后将脑片放入2%的TTC磷酸盐缓冲液中，37 ℃恒温孵育30 min，正常脑组织染色呈红色，梗死灶染色呈白色，将白色和红色脑组织进行分离，滤纸吸取表面液体，分别称重，计算脑切片中脑梗死部分质量百分比（以质量百分比反应梗死体积比）。（3）各组剩余大鼠，快速断头取脑。取损伤侧脑组织称重并在冷磷酸盐缓冲液中制成10%脑匀浆，离心，取上清，低温冰箱保存。严格按照试剂盒操作，检测脑组织上清液中SOD、MDA水平。 　　1.6 统计学处理 　　采用SPSS 19.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，比较采用t检验，P0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2.1 四组大鼠神经功能评分比较 　　模型组大鼠神经功能评分高于假手术组，说明模型组大鼠神经功能受损；尼莫地平对照组、冰七片治疗组大鼠神经功能评分均低于模型组，与模型组比较，差异均有统计学意义（P0.05），详见表1。 　　2.2 四组大鼠脑梗死体积比较 　　模型组大鼠脑梗死体积要高于假手术组，尼莫地平对照组和冰七片治疗组大鼠脑梗死体积均低于模型组，与模型组比较，差异均有统计学意义（